ГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ

Глава 9 МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ

И ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОСТЕЙШИХ

9.1. ТОЛСТАЯ КАПЛЯ КРОВИ

С целью обнаружения гемопаразитов микроскопируют с иммерсионным маслом под большим увеличением мазок (см. курс общеклинических лабораторных исследований) и толстую каплю крови (рис. 9.1).

Толстую каплю в отличие от мазка, крови не фиксируют. Под влиянием водного раствора краски нефиксированные эритроциты гемолизируются, препарат становится прозрачным. Это ускоряет и облегчает нахождение паразитов, так как в одном поле зрения можно исследовать гораздо больший объем крови, чем в мазке.

Если же толстая капля будет зафиксирована, то гемолиза эритроцитов не произойдет, они будут наслаиваться друг на друга и препарат окажется непригодным для микроскопии.

Слой крови в толстой капле не должен быть очень толстым, иначе после высушивания оиа трескается и может отпасть. Нормальной считается толстая капля, через которую после высушивания слабо просвечивает крупный печатный текст, а при микроскопии в одном поле зрения насчитывается в среднем 10—15 ядер лейкоцитов.

Хорошие препараты крови можно приготовить только используя чистые обезжиренные предметные стекла.

Стекла моют горячей водой с мылом или кипятят в 1 % растворе стирального порошка, затем тщательно прополаскивают горячей и дистиллированной водой. Вымытые стекла вытирают хлопчатобумажной тканью или сушат в сухожаровом шкафу, заворачивают в неворсистую бумагу и хранят до употребления.

Лабораторная работа № 1. Приготовление толстой капли крови

Оборудование: предметные стекла (сухие, чистые, обезжиренные); копья или скарификаторы одноразового применения для прокола кожи; вата; 70 % этанол; эфир; простой и восковый карандаши.

Методика работы. 1. Несколько чистых предметных стекол положить на стол.

2. Ватой, смоченной 70 % этанолом, протереть концевую фалангу IV пальца левой руки пациента (на занятии учащиеся

берут кровь для приготовления препаратов друг у друга).

3. После высыхания этанола проколоть кожу пальца с ладон6 — этапы приготовления тонкого мазка; 7—9 — неправильно приготовленные мазкн; 10—12 — разные способы приготовления толстой каплн.

ной стороны копьем, ставя плоскость копья поперечно к линиям кожного рисунка.

4. Выступившую первую каплю крови снять сухой ватой.

5. Нажимая на боковые поверхности пальца по направлению

к месту прокола (палец пациента при этом держат опущенным)

выдавить крупную каплю крови.

6. Предметным стеклом, держа его за боковые ребра, прикоснуться и снять выступившую каплю крови, которую располагают отступя на 2—2,5 см от узкого края стекла.

7. Круговыми движениями стекла размазать каплю, доводя ее размер до 1,5 см в диаметре.

8. Точно так же приготовить толстую каплю на другой половине стекла. Расстояние между каплями должно быть не менее 2 см.

9. В промежутке между каплями нанести на стекло полоску крови, на которой после высушивания написать простым каран-шом номер по списку или фамилию пациента. Делать подобную надпись на поверхности толстой капли недопустимо, так как это портит препарат и затруднит микроскопическое исследование.

10. Стекла в горизонтальном положении положить на стол (в

кювету) для просушивания, предохраняя от попадания прямых

солнечных лучей, пыли и мух.

11. Ранку на пальце обработать ватой, смоченной этанолом.

9.2. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА

КРАСКИ РОМАНОВСКОГО

Краска Романовского (правильнее — по Романовскому — Гимзе) состоит из двух красящих веществ — азура и эозина, разведенных метанолом или этанолом с добавлением глицерина. Заводская краска (азур-эозин по Романовскому) поступает в сухом или жидком виде.

Для разведения сухой краски рекомендуется 5 г ее тщательно растереть в фарфоровой ступке с постепенным добавлением 50 мл глицерина, а затем 450 мл 96 % этанола. По мере растирания смесь сливают в колбу, встряхивают не менее 10 мин, а при наличии аппарата для встряхивания или магнитной мешалки — в течение нескольких часов. Затем помещают в термостат при температуре 37 °С на 3—5 дней для созревания краски.

Встряхивание повторяют ежедневно. Готовый раствор краски фильтруют через бумажный фильтр.

Хранят краску в хорошо закупоренной темной бутыли отдельно от кислот и щелочей, в защищенном от света месте. Если при длительном хранении краски образуется осадок, то рекомендуется ее профильтровать.

Для приготовления рабочего раствора краску Романовского разводят дистиллированной водой, причем краску добавляют к воде, а не наоборот. При получении новой серии предварительно готовят несколько разведений'жидкой краски — по 1, 2 и 3 капли на 1 мл дистиллированной воды и окрашивают несколько мазков крови. По наиболее хорошо окрашенному мазку определяют, какое количество капель жидкой краски следует брать и сколько времени необходимо красить. По стандартной методике рекомендуется брать 3 мл концентрированной краски на 100 мл раствора или 1—2 капли краски на 1 мл раствора.

На качество окраски влияет реакция дистиллированной воды.

Наилучшие