бкой при комнатной температуре не более месяца.

Цисты окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. На фойе цитоплазмы заметны ядра, видны их строение и число. Хорошо виден гликоген, окрашивающийся в разные оттенки коричневого цвета. При окраске раствором Люголя вегетативные формы погибают и определяются с трудом.

Лабораторная работа № 4. Приготовление мазков

Оборудование: предметные и покровные стекла; деревянные палочки длиной 10—15 см; пипетки; изотонический раствор хлорида натрия; раствор Люголя; сосуд с 3 % раствором хлорамина; микроскоп.

Приготовление нативного мазка. l.Ha столе в большой кювете или на листе оконного стекла разложить обезжиренные чистые предметные стекла.

2. На предметные стекла, отступя от края на 1,5—2 см, пипеткой нанести по 1—2 капле изотонического раствора в двух местах с промежутком в 4 см.

3. Коичиком деревянной палочки из пробы фекалий выбрать патологические примеси или небольшой кусок и перенести в каплю на предметное стекло, растереть до получения равномерной негустой эмульсии.

4. Той же палочкой набрать вторую порцию фекалий из другого участка пробы и приготовить препарат из второй капли на предметном стекле. Палочку оставить в банке с пробой фекалий.

5. Полученные препараты (нативные мазки), если они оказались сухими, разбавляют из пипетки одной каплей изотонического раствора, накрывают стеклами и микроскопируют.

Примечание: если после наложения покровного стекла капля эмульсии выступила из-под покровного стекла и попала на его верхнюю сторону, то препарат бракуют и готовят новый.

Приготовление мазка, окрашенного раствором Люголя. 1. На предметное стекло нанести по 1 — 2 капли раствора Люголя в двух местах.

2. Деревянной палочкой набрать фекалии каждый раз из другой части пробы и растереть в приготовленных каплях на предметном стекле до получения равномерной эмульсии.

3. Препараты накрыть покровными стеклами и поочередно микроскопировать при среднем увеличении.

4. По окончании работы предметные стекла с мазками поместить в посуду с дезинфицирующим раствором, убрать рабочее место и вымыть руки.

9.7. МЕТОДЫ ОБОГАЩЕНИЯ

ИЛИ НАКОПЛЕНИЯ ЦИСТ

Применяются только с целью обнаружения цист. Для исследования жидких фекалий, в которых, как правило, обнаруживаются вегетативные формы простейших, эти методы не пригодны.

Метод всплывания. При смешивании материала, содержащего цисты, с жидкостями, имеющими большую относительную плотность, чем цисты, последние всплывают и находятся в поверхностной пленке.

Предварительно отмывают цисты от фекалий. В противном случае в поверхностную пленку всплывут многочисленные частицы фекалий, что очень затруднит исследование. Для отмывания 1 г фекалий тщательно размешивают в 10 мл воды в центрифужной пробирке и центрифугируют 45 с — 1 мин при 2500 об/мин. Поверхностную жидкость сливают, а к осадку добавляют воду, и процедуру повторяют. Центрифугируют несколько раз, пока над-осадочная жидкость не станет прозрачной.

После этого к осадку добавляют 33 % раствора сульфата цинка. Тщательно перемешивают и центрифугируют 2 мин. Исследуют поверхностную пленку, которую снимают петлей.

Метод формалин-эфирного обогащения. При обработке фекалий по этому методу происходит отделение и концентрация цист простейших кишечника.

Лабораторная работа № 5.

Исследование фекалий методом формалин-эфирного обогащения

Оборудование: раствор формалина (формалин 40 % — 10 мл; хлорид натрия — 0,9 г; вода дистиллированная — до 100 мл); эфир серный; раствор Люголя; пробирки химические и центрифужные; центрифуга; деревянные палочки; вата; пипетки; предметные стекла; покровные стекла; микроскоп.

Методика работы. 1. В пробирку налить 6 мл раствора формалина. Частицу фекалий размером с горошину внести в пробирку и тщательно эмульгировать (размешать).

2. В пробирку добавить 2 мл эфира, закрыть резиновой пробкой, энергично встряхивать в течение 1 мин, затем центрифугировать 3 мин при 1500 об/мин.

3. Образовавшийся после центрифугирования между слоями формалина и эфира слой фекалий деревянной палочкой осторожно отделить от стенок пробирки и вылить все содержимое пробирки, оставив в пробирке только придонный осадок.

4. Наклонив пробирку отверстием книзу, быстро протереть ватным тампоном ее внутренние стенки, чтобы удалить возможно больше жидкости.

5. Перевернуть пробирку отверстием кверху, пипеткой забрать оставшуюся часть (осадок) со дна пробирки и перенести на предметное стекло.

6. Добавить каплю раствора Люголя, накрыть покровным стеклом и исследовать под малым и средним увеличением.

9.8. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПОСТОЯННЫХ ОКРАШЕННЫХ

ПРЕПАРАТОВ

Исследование постоянных окрашенных препаратов простейших производится, когда изучение свежих препаратов не позволяет установить вид простейших. В постоянно окрашенном препарате отчетливо выявляются структура простейшего и строение ядра, что дает возможность провести точную видовую диагностику. Микроскопируют окрашенные препараты с иммерсионной системой.

Существует много методов приготовления постоянных