окрашенных препаратов, но одним из наиболее распространенных считается метод Гейденгай-н а.

Ниже приводится упрощенная методика (модификация Фауста). Мазки готовят из фекалий по тем же правилам, которые рекомендованы для приготовления свежих неокрашенных препаратов. Если используется несвежий материал, то хороший препарат получить не удается, так как простейшие дегенерируют и их морфологические признаки меняются.

Мазок исследуемого материала готовят на покровном стекле. Стекло намазанной стороной вниз бросают на поверхность фиксатора Шаудинна, налитого в большое часовое стекло (состав фиксатора: насыщенный раствор сулемы — 6 мл; этанол 96 % — 3 мл; ледяная уксусная кислота — 0,5 мл). Мазки фиксируют в подогретой до 60 °С жидкости Шаудинна в течение 2 мин. После этого пинцетом осторожно переворачивают стекло мазком вверх. В таком положении мазок должен находиться во время всех следующих манипуляций, за исключением самой последней. Мазки проводят через 3 порции 70 % этанола и затем через 50 % этанол по 2 мин в каждом растворе. Промывают мазки дистиллированной водой 2 мин.

Если по каким-либо причинам дальнейшая обработка препарата не может быть проведена, то его можно сохранять в 70 % этаноле в течение нескольких месяцев.

Следующая операция — протравливание. Промытые мазки помещают в 2 % водный раствор железоаммиачных квасцов, подогретый до 40 °С, на 2 мин. Окрашивание производят гематоксилином. После протравливания препарат промывают в течение 3 мин дистиллированной водой. Затем помещают в 0,5 % водный раствор гематоксилина на 2 мин.

С целью дальнейшей дифференциации мазков препараты ополаскивают 2 мин дистиллированной водой и помещают в холодный 1 % раствор железоаммиачных квасцов на 2—5 мин. В тех случаях, когда отсутствует навык определения на глаз степени обесцвечивания, следует дифференцировать мазки под контролем микроскопа.

После дифференцировки мазки хорошо промывают в воде, иначе под действием остатков квасцов препарат постепенно выцветает.

Обезвоживание и заключение в бальзам — заключительная стадия. Перед заключением в бальзам мазок должен быть хорошо обезвожен и просветлен.

Обезвоживание достигается проведением через 70, 80 , 90 °С растворы этанола и абсолютный этанол по 2 мин в каждом. Затем просветляют в ксилоле в течение 1—2 мин.

Мазком вниз препарат помещают в каплю бальзама, нанесенную на предметное стекло. Бальзам должен равномерно распределиться между стеклами, без образования пузырьков. Для этого следует слегка надавить на покровное стекло.

9.9. КОНСЕРВАЦИЯ

Необходимость в консервации простейших возникает при заборе материала у больных в сельской местности, на дому, при удаленности лаборатории от стационара или невозможности срочного исследования, направлении материала на консультацию и т. д.

Консервант можно заранее разлить во флаконы и передать в лечебные учреждения для последующего сбора фекалий. К недостаткам относятся потеря подвижности и определенная деформация простейших, что заметно затрудняет диагностику. Поэтому сбор фекалий в консервант не может заменить исследование нативных препаратов.

Консерванты могут иметь различный состав. Консервант Барроу [Burrows, 1967]

а) консервирующий раствор:

хлорид натрия 0,7 г

формалин концентрированный 5 мл

этанол 96% 12,5 мл

фенол кристаллический 2 г

вода дистиллированная до 100 мл

б) красящий раствор:

0.1 раствор тионина илн азура, при их отсутствии — метиленового синего

Этим консервантом пользуются, когда исследование материала возможно в сроки не более 2 мес. Консервант Сафаралиева (1963)

сульфат цинка 1,65 г

формалин концентрированный 10 мл

фенол кристаллический 2,5 г

уксусная кислота концентрированная 5 мл

метиленовый синий 0,2 г

вода дистиллированная до 100 мл

Фенол предварительно растапливают на водяной бане. Этот консервант используют при исследовании материала в сроки более месяца. Простейшие окрашиваются в синий цвет (рис. 9.2 на цв. вклейке).

Консервант Турдыева (1966)

водный раствор нитрита натрия (0,2 %) 80 мл

раствор Люголя 8 »

формалин концентрированный 10 »

глицерин 2 »

уксусная кислота крепкая 5 капель

Раствор Люголя готовят, растворяя в 250 мл дистиллированной воды 10 г иодида калия и 5 г кристаллического иода.

Консервант отличается от предыдущих тем, что простейшие в нем не окрашиваются и не теряют блеска (рис. 9.3). Материал из консерванта Турдыева при необходимости можно обработать раствором Люголя по общепринятой методике. Простейшие сохраняются несколько месяцев.

Рис. 9.3. Амебы и их цисты в консерванте Турдыева.

1 — просветная форма дизентерийной амебы через 5 нед пиелле консервирования:

2 — гематофаг (дизентерийная амеба) через 11 мес после ко!(еорвирования: 3 — одноя дерная циста дизентерийной амебы через 10 мес после консервирования; 4 — зрелая циста кишечной амебы через 2 мес после консервирования.

Ход обнар уж ения простейших. Консервант разливают в пенициллиновые флаконы примерно до половины их объема. Исследуем