1:1).

После размешивания доливают растворитель до объема посуды и дают отстояться в течение 20—30 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок исследуют под микроскопом. Для лучшей концентрации осадок вновь взбалтывают с растворителем в том же стакане, оставляют еще на 10 мин. Осадок забирают пастеровской пипеткой, помещают 2 капли на предметное стекло и исследуют.

Метод Ритчи. В сосуде вместимостью 150 мл смешивают 2 г фекалий с 10 мл изотонического раствора хлорида натрия и помещают в центрифужную пробирку вместимостью 15 мл. Пробирку закрывают пробкой и встряхивают 30 с. Затем пробку удаляют, а содержимое центрифугируют 2 мин при 2000 об/мин.

После этого надосадочную жидкость сливают, добавляют к осадку 10 мл 10% раствора формалина, тщательно смешивают и дают отстояться 5 мин. Добавляют 3—4 мл эфира, закрывают пробирку пробкой, встряхивают для получения однородной массы, удаляют пробку и центрифугируют повторно 2 мин.

В результате в пробирке образуется 4 слоя: 1) осадок на дне пробирки с яйцами шистосом; 2) слой формалина; 3) слой фекального детрита; 4) слой эфира. Аппликатором удаляют детрит, сливают надосадочную жидкость (смесь формалина с эфиром), осадок с придонного слоя забирают пастеровской пипеткой и переносят иа предметное стекло, исследуют под малым увеличением микроскопа.

10.11. ОБНАРУЖЕНИЕ ЛИЧИНОК ГЕЛЬМИНТОВ В ФЕКАЛИЯХ КУЛЬТИВИРОВАНИЕМ НА ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ БУМАГЕ (МЕТОД ХАРАДА И МОРИ)

Метод разработан японскими учеными Харада и Мори и рекомендован ВОЗ для исследования на анкилостомидозы.

Культивирование личинок рекомендуется проводить в остаточных очагах анкилостомидозов и при необходимости отличить анкилостомоз и некатороз.

Метод основан на том, что в тепле на влажной фильтровальной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить.

На полоску фильтровальной бумаги размером 15 X 1,5 см наносят 0,5 г фекалий, оставляя оба конца полоски чистыми. Бумагу с фекалиями помещают в пробирку, заполненную водой так, чтобы нижний конец полоски, свободный от фекалий, был погружен в воду, а другой чистый конец выступал из пробирки и мог бы быть закреплен пробкой (рис. 10,4). Можно для указанной цели использовать банку вместимостью 0,8 л и полоску фильтровальной бумаги размером 16 X 3,5 см.

Пробирку выдерживают в термостате при температуре 28 °С в течение 5—6 дней. В теплое время года можно оставить пробирки при комнатной температуре на 8—10 дней.

Филяриевидные личинки, развившиеся за это время, спускаются и оседают на дне. По окончании инкубации бумагу извлекают и уничтожают, а жидкость исследуют под лупой. В сомнительных случаях жидкость центрифугируют и осадок микроско-пируют, убив предварительно личинки нагреванием жидкости в пробирке при температуре 60°С. Лаборант должен работать в резиновых перчатках.

По строению личинок можно дифференцировать анкилостомоз и некатороз (табл. 10.1, см. рис. 10.4).

Рис. 10.4. Культивирование личиное анкилостомид на листе фильтровальной бумаги в пробирке по методу Харада и Морн.

а — пробирка с культивируемым материалом: 1 — пробка, закрепляющая бумажную полоску; 2 — бумажная полоска; 3 проба фекалий, нанесенная на полоску; 4 — вода; б — филяриевидные личинки анкилостомид: 1 — анкилостома; 2 — некатор.

Таблица 10.1. Основные различия личинок анкилостомы и некатора (по данным ВОЗ, 1964)

Признаки Анкилостома Некатор

Длина тела, мкм 660 590

Исчерченность чехлика Выражена слабо Заметно выражена, осо бенно в хвостовой части

Ротовой выступ Менее заметен Темный ,

Передний коней тела Тупой Заострен

Диаметр передней части ки Бульбус шире Одинаковы

шечной трубки н бульбуса

пищевода

Хвостовой конец Тупой Резко заострен

10.12. ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ

ПРИ МИКРОСКОПИИ ИСПРАЖНЕНИЙ

При микроскопии испражнений встречаются образования, напоминающие яйца гельминтов и их личинки. Так, иногда пузырьки воздуха принимают за онкосферы тениид. Пузырьки —

Рис. 10.5. Растительные клетки из кала человека, напоминающие яйца гельминтов.

круглые, толщина «оболочки» и диаметр их различны, внутренняя часть совершенно прозрачна и лишена структуры, ободок черного цвета.

Жировые капли также отличаются разнообразием размеров и бесструктурностью, хотя некоторые своей продолговатой формой могут напоминать яйца остриц.

Более сложной является дифференциация растительных клеток, спор и пыльцы растений, пищевых частиц и других возможных включений (рис. 10,5). Растительные волоски могут быть приняты за личинок гельминтов (рис. 10.6). Указанные включения и частицы могут содержаться в испражнениях, а также попасть в них извне.

Рис. 10.6. Растительные волокна из кала человека, напоминающие личинки гельминтов.

.ж

Во всех сомнительных случаях необходимо учитывать размер, строение оболочек, цвет и морфологию обнаруженных образований, в случае необходимости проводить повторные анализы. Некоторые подобные образования представлены на рис. 10.7 (на цв. вклейке).

10.13. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ