медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

гибели (Nicols J., Zevnik B., Anastassiadis K. Et al., 1998). Однако клетки трофобласта также вяло пролиферируют, поскольку в зародышах отсутствует FGF4 (индуктором экспрессии гена FGF4 является Oct4). Все зародыши-гетерозиготы Oct4-/+ проходят фазу имплантации без аномалий, поскольку 30-50% уровня Oct4 в эмбриобласте достаточно для его превращения в эпибласт и первичную полоску. Уровень Oct4 не влиял существенно на постимплантационную гибель зародышей.

Особую роль рецептор LIF/ GP-130 играет в задержке развития бластоцист у мышей, других грызунов на стадии диапаузы. Такие «законсервированные» на 3-4 нед бластоцисты, переживающие в полости матки, содержат зрелые клетки эпибласта вместо эмбриобласта. У зародышей с поврежденным GP-130 блокировано созревание эпибласта в диапаузных бластоцистах (Smith A.G., 2001)

Jak-Stat-3 "кабель" транссигнализации используется региональными гематогенными, мышечными стволовыми клетками для самообновления клеток клонов. LIF - рецептор ЭСК существенно влияет на выживание прогениторных клеток в культуре. Michel Revel из Вайссмановского института в Израиле показал, что прогениторные клетки в гематогенных клонах теряют способность формировать димерный вариант рецептора, который способен связывать IL-6. Такие клетки немедленно элиминируются из клона апоптозом. Если стволовые клетки трансфицировать генетической конструкцией, содержащей ген лиганда IL-6 и ген GP-130 рецептора, то трансфицированным клонам возвращается потенция к неограниченному самообновления с минимальным апоптозом. Такие клоны долгосрочно обновлялись in vitro и in vivo (Kollet O., Aviram R., Chebat J. et al., 1999).

Рис 1-9. Система сигнализации LIF-рецептора в клеточное ядро

На следующем этапе прогениторные клетки пролиферуют под контролем спаренных рецепторов Delta/Notch в комплексе с фактором тотипотентности- продукта семейства генов Hes (Hes7 в клонах мезодермы, сомитах и клонах миогенных стволовых клеток скелетных мышц). В клонах стволовых клетках ЦНС экспрессирована пара Нes1, Hes5, тогда как один Hes5 экспрессирован в клетках- предшественицах олигодендроцитов.

"Минимальный фенотип" ЭСК и примордиальных половых клеток (ППК) проявлялся ошаренной формой клеток из-за отсутствия цитоскелета, белков и рецепторов адгезии на поверхности плазматической мембраны, а также многих кофакторов сигнализации, вмонтированных в компоненты цитоскелета. ЭСК и ППК имели высокую активность теломеразы и щелочной фосфатазы. В отличие от региональных стволовых клеток ППК не имели на поверхности бета1-интегрина. ППК вступают в дифференцировку, формируя вторичные агрегаты клеток в суспензии (эмбриоидные тельца).

В последние годы бессмертные тотипотентные линии ЭСК были выделены из эмбрионов крыс, коровы, приматов, свиней. Показательно, что все ЭСК имели не только близкое строение, но и практически универсальный набор антигенов-маркеров, (SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-81, TRA-1-60). (Таблица 2)

Таблица 2. Сравнительные характеристики фенотипа ЭСК разных видов

Название маркёра ЭСК/ППК/ТК

Мыши ЭСК приматов ЭСК человека ППК человека ТК человека

SSEA-1 + - - + SSEA-3 - + + + +

SEA-4 - + + + +

TRA-1-60 - + + + +

TRA-1-81 - + + + +

Щелочная фосфатаза + + + + +

Oct-4 + + + Данные отсутствуют +

Высокая активность теломеразы + ЭСК, ТК Данные отсутствуют + Данные отсутствуют +

Зависимость от фидера ЭСК, ППК, некоторые ТК Имеется Имеется Имеется Небольшая, низкая клоногенность

Факторы, способствующие самообновлению стволовых клеток LIF и другие факторы, действующие через gp130- рецептор, способны замещать фидер Сокультивирование с фидерными клетками; другие факторы не выявлены Фидерные клетки + сыворотка; фидер + бессывороточная среда + bFGF LIF, bFGF, форсколин Факторы не выявлены, утеря тотипотентности в пассажах

Характеристики роста in vitro Округлой формы, многослойные агрегаты ЭТ Агрегаты ЭТ уплощённой формы Агрегаты ЭТ уплощённой формы Округлой формы, многослойные агрегаты ЭТ Агрегаты ЭТ уплощённой формы

Формирование тератом in vivo + + + - +

Образование химер + Данные отсутствуют + - +

Внешние домены этих "метчиков" представлены комплексом гликолипида GL7 с сиаловой кислотой. Фенотипические характеристики ЭСК и ППК не менялись после 20-30 пассажей. Культура продолжала расти плотными суспензионными клонами, в которых клетки удерживались плотными межклеточными контактами, резистентными к трипсину (рис 1-4 г-д).

6. ЭСК – модель для изучения геномики раннего эмбриогенеза и органогенеза

С помощью ЭСК удалось выяснить первые гены, либо комбинации генов, реализующие трехмерную карту зародыша, а также коды линейного созревания клеток-предшественниц в зрелые функциональные единицы органов (дольки печени, альвеолы легкого, нефроны почек). Развитие зародышей с выключенной гамма-субъединицей ламинина LAMC1-/- останавливается на стадии формирования экстраэмбриональной энтодермы из-за дефекта миграции клеток (Smyth N., Vatansever S.H., Murray P. et al., 1999). Нокаут гена Br

страница 19
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.02.2019)