медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

тестов. В культуре НСК вели себя как самообновляющиеся в клонах незрелые плюрипотентные клетки с набором селективных фенотипических признаков. После остановки пролиферации они дифференцировались в нейроны, глию и олигодендроциты ( Price J., Williams B., 2001). При этом потенция к трансдифференцировке НСК in vivo в случае их пересадок животным был всегда больше, чем их потенциал in vitrо. Сигналы микроокружения в ткани играли решающую роль в сульбе трансплантированных клеток.

В 1990 г австралийские биологи во главе с Перри Бартлеттом впервые предложили метод селективного выделения клоногенной культуры НСК из мозга эмбрионов и взрослых животных. С помощью бессывороточной среды, содержащей LIF, bFGF и другие кофакторы, удалось на первом этапе культивирования избавиться от более продвинутых примесных клеток (Murphy M., Drago J., Bartlett P.F., 1990). Это был решающий методический успех, поскольку смешанное культивирование НСК и дифференцированных клеток вело к быстрой гибели, либо спонтанной дифференцировке НСК. Эта группа первой описала особенности роста и дифференцировки суспензионных клонов НСК/прогениторных клеток, а также первой получила иммортализованную линию НСК мышей с помощью трансфекции онкогена c-myc (Bartlett P.F., Reid H.H., Bailey K.A. et al, 1988). В отличие от "природных" НСК, иммортализованные с помощью онкогенов линии стволовых клеток переставали расти клонами. Через два года Reynolds и Weiss использовали близкий подход для выделения суспензионной клоногенной культуры НСК, добавляя в среду сразу два ростовых фактора (EGF, bFGF). Характеристики полученных культур, особенности роста клонов НСК в главном совпали с результатами Бартлетта (Reynolds B.A.,Weiss S.,1992). В 1994 г. Davis и Temple первыми количественно и качественно охарактеризовали клоны НСК, выделенные из мозга эмбрионов крыс. Лишь 7% клонов быстро обновлялись, продуцируя более 60 % всех клеток культуры. Около 40 % клеток в клонах составляли некоммитированные плюрипотентные клетки, которые в специальных условиях дифференцировались в нейроны, астроглию или олигодендроциты. Выращивая клетки в максимальных разведениях, удалось подсчитать примерное число клон-инициирующих клеток. Все клонобразующие клетки экспрессировали нестин - белок промежуточных филаментов нейроэпителия. Характерно, что все клоны НСК с максимальной скоростью обновления прогениторных клеток имели максимальный уровень экспрессии мРНК гена Hes-1 – главного фактора плюрипотентности НСК (Nakamura Y., Sakakibara S., Miyata N., 2000). Экспрессия гена Hes-1 связана с самообновляемостью плюрипотентных клеток в нейросферах. Путем механического разбивания нейросфер, авторам удалось получить вторую и третью генерацию колоний. Клетки клонов после трех пассажей сохраняли плюрипотентность. Авторы выявили гетерогенность клеток нейросфер по чувствительности к ростовым факторам. Цитокины ВМР-2 и ВМР-4 вызывали дифференцировку прогениторных незрелых клеток в нейроны in vitro.

Природная гетерогенность клеток в нейросферах, изолированных из эмбрионального мозга млекопитающих, была отмечена в первых же работах Маркерные молекулы нейроэпителия (виментин, нестин, polysyalated-NCAM, GFAP, CD133 и др ) прокрашивали разные субпопуляции клеток нейросфер (Ushida N., Buck D.W.,Weismann I.L. et al., 2000). В нейросферах из фетального мозга человека антитела к нестину и СD133 прокрашивали до 30-50% клеток. Как известно, СD133 является маркером гематогенных стволовых клеток. Некоторые культуры НСК удалось пассировать без онкомодификации (только на комбинации ростовых факторов в течение 2-3 лет) (Zhou F.C., Chiang Y.H., 1998). Доля клонов в культуре широко варьировала (0,1%- 25% в расчете на общую численность клеток) (Hulspas R., Quesenberry P.J., 2000). С помощью набора ростовых факторов (bFGF, SCF, EGF, LIF. ILGF-1) и своевременной дезагрегации удалось поддерживать и размножать клоногенную культуру плюрипотентных НСК в течение 1-3 лет без утери основных биологических характеристик незрелых плюрипотентных клеток (Carpenter M.K., Cui X., Hu Z., et al., 1999; Kallos M.S.,Behie L.A.,1999; Kallos M.S., Behie L.A., Vescovi A.L.,1999). Добавление к среде культивирования LIF (20-50 нг/мл) уменьшало время удвоения клеточной массы с 25-30 до 10 дней ( Carpenter M.,патент США No6103530). Такие длительно пассируемые культуры НСК не только сохраняли фенотип, плюрипотентность in vitro, но и уникальную способность направленно мигрировать, находить участки повреждениой ткани, интегрироваться в дефект нейронной сети in situ. В ряде случаев это приводило к полному/частичному восстановлению утраченной функции ЦНС (Rubio F.J., Bueno C., Villa A. et al, 2000). Первыми в онтогенезе мозга млекопитающих появляются так называемые f-нейросферы, пролиферация которых зависит только от bFGF. На более поздних стадиях развития появляются e-f-нейросферы, пролиферация которых более зависима от EGF , чем от bFGF ( Ciccolini, 2001).

Из эмбрионального и взрослого мозга человека выделяли клоногенную

страница 47
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(25.08.2019)