медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

культуру НСК с фенотипом астроглии (Laywell E.D., Rakic P., Kukekov V.G. et al., 2000). Около 5-7% свежеизолированных нейросфер содержали Notch1+ прогениторные клетки. Эти же авторы выделяли жизнеспособные нейросферы из длительно хранившейся нервной ткани (4-6 дней при +4 С).

НСК с фенотипом астроглии (GFAP+ клетки) чаще всего локализованы в субэпендимальном слое желудочков. При изолировании и культивировании до 60% НСК/прогениторных клеток из перивентрикулярной зоны мозга элиминируются апоптозом (Levinson S.W., Rothstein R.P.,Brazel C.Y. et al., 2000). Низкие цифры жизнеспособности клеток в первичной культуре или пассажах могут быть связаны с присутствием нейросфер с высокой скоростью обновления клеток. Не только фетальная мозговая ткань может быть источником НСК. Кора больших полушарий постнатального мозга является богатым источником нейросфер и прогениторных популяций, инициирующих образование клонов в культуре (Mehler M.F., Gokhan S., 1999). Даже хирургические биоптаты позволили регулярно изолировать НСК из мозга оперированных людей любой возрастной группы ( Kukekov V.G., Laywell E.D., Suslov O. Et al.,1999). Отработана методика сортировки нейросфер по фенотипу с последующим изучением "профиля" мРНК с помощью ПЦР. Метод позволил сопоставить наборы мРНК в нейросферах разного фенотипа или разного происхождения (Suslov O.N., Kukekov V.G., Laywell E.D. et al., 2000). По нашим

данным, нейросферы, выделенные из фетальной мозговой ткани 8-12 нед и 17-21 нед гестации, характеризовались весьма выраженной морфологической гетерогенностью (средними размерами клонов и формой клеток в клонах), гетерогенностью иммунофенотипа ( варьирующим процентом нестин+, виментин+, N-кадхерин+, кадхерин-11+, NCAM+, GFAP+ клеток в разных клонах).

В культуре процент примеси более продвинутых клеток в изолированных нейросферах не превышал 1-2% (по уровню CD34+, MHCI, MHCII + клеток) (Ржанинова А.А., Репин В.С. и др., 2001).

Рис 2-6. Гетерогенность клонов НСК из фетального мозга

На всех фотографиях заметна морфологическая гетерогенность клонов, по форме и упаковке клеток в клонах.

Количество нестин+, виментин+, кадхерин11+ , GFAP+ клеток сильно варьировало в первичной суспензионной культуре и трех первых пассажах. Относительная доля указанных маркеров не изменялась существенно при пассировании и колебалась в пределах 5-25%. Ни в одной первичной культуре нейросфер не наблюдали превалирования монофенотипа до уровня 40-60% от всех клеток нейросфер. Этот постоянный полиморфизм подтверждал «пластичность» нейросфер, собранных

из разных нейроэктодермальных и нейромезенхимальных плюрипотентных клеток. Возможно это природное разнообразие прогениторных клеток с разным набором мРНК и фенотипических маркеров обеспечивает плюрипотентность клона, которая всегда больше, чем одна линия НСК. Пока не ясно, как реализуется это преимущество в эмбриогенезе мозга. Однако «репертуар» НСК максимален в развивающемся мозге человека.

При длительном культивировании и в пассажах наблюдали отпочковывание новых клонов из старых, а не только рост клонов за счет экспансии периферических слоев прогениторных клеток.

Рис 2-7. Появление новых суспензионных клонов НСК отпочковыванием при высоких плотностях культивирования

В плотной культуре наблюдали отпочковывание новых колоний из выросших крупных нейросфер. Этот феномен пока мало изучен, поскольку затруднено его моделирование in vitro.

Похожие феномены отпочковывания клон-инициирующих клеток наблюдали в культуре изолированных крипт фетального тонкого кишечника при попытке получения клоногенной культуры эпителия тонкой кишки фетуса ( Рис 2-8)

Часть клонов в культуре прикреплялась к подложке с помощью крупных распластанных клеток, имеющих фенотип стромальных. Этот феномен был описан ранее в лаборатории Gottlieb при получении нйеронов из клеток тератокарциномы ( Bain G., Kitchens D., Yao M. et al.,1995) . Стимулируя нейрогенез в эмбриоидных телах с помощью ретиноевой кислоты и других добавок, авторы наблюдали опережающей миграцию крупных распластанных по подложке клеток. Далее на их поверхности появлялись клетки типичной формы с отростками, которые имели набор маркеров нейробластов. Авторы не определили природу этих клеток. Однако эффективность нейрогенеза была выше в тех зонах миграции, где появлялись бислойные участки культуры.

Рис 2-8 Процесс отпочковывания новых клон-инициирующих центров в изолированной крипте тонкого кишечника, выделенной в культуру. Такие фрагменты крипт с двумя и несколькими центрами пролиферации продолжали процесс выделения новых стволовых ниш в культуре.

Рис 2-9. Спонтанная дифференцировка прогениторных клеток в клонах, прикреплённых к подложке

Комбинация T3, PDGF LIF индуцировала дифференцировку прогениторных клеток в олигодендроциты. Особенность роста клонов в культуре связана с тем, что все клоны с разной скоростью росли до стадии равновесия (renewal), когда число пролиферирующих клеток уравновешалось числом гибнущих и мигр

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(23.08.2019)