медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

ирующих клеток, покидающих клон. Одним из важных маркеров прогениторных клеток, отличающих их от НСК, является формирование электровозбудимой мембраны, в частности появление кальцевых и натриевых токов, регистрируемых техникой patch-clamp (Piper D.R., Mujtaba T., Rao M.S. et al., 2000). В условиях культуры отношение bFGF+EGF/BMP-4 регулировало как общую численность, так и долю прогениторных клеток в нейросферах. Без ВМР-4 оба митогена давали максимальный прирост клеток в нейросферах, тогда как повышение концентрации ВМР-4 в среде останавливало

пролиферацию, стимулировало апоптоз и постмитотическую дифференцировку клеток, особенно с периферии клонов (Lillien L., Raphael H., 2000). Изолированные в культуру нейросферы экспрессировали три изоформы рецептора (Erb2,Erb3, Еrb4), причем мРНК Erb2 и Erb4 максимальна в прогениторных слоях. In situ максимальную концентрацию мРНК Erb2, Erb4 выявляли в перивентрикулярной зоне и герментативном слое развивающегося мозга крыс (Kornblum H.I., Yanni D.S., Easterday M.C. et al., 2000).

В культуре гетерогенных нейросфер, спонтанно прикрепляющихся к подложке, мы наблюдали опережающую миграцию cadherin-11+ вытянутых биполярных клеток. Позднее вдоль тяжей этих клеток мигрировали типичные ошаренные прогениторные клетки (либо миграция шла целым кластером клеток). Образование клеток радиальной глии из прикрепленных нейросфер, выделенных из коры постнатального мозга человека, наблюдали независимо в лаборатории Clive Svendsen ( Caldwell M.A., He X., Wilkie N. et al.,2001). Для этого выросшие нейросферы помещали на подложку полилизин/ламинин и давали сферам прикрепиться. После этого стимулировали миграцию клеток комбинацией NT,CNTF,PDGF. Клетки возникающей радиальной глии с типичными маркерами опережающе мигрировали из сфер.

Нет однозначных представлений по поводу фенотипа и микроокружения НСК , выделяемых из разных отделов головного и спинного мозга. Согласно некоторым данным, превалирующая часть НСК в растущем и зрелом головном мозге локализована в эпендиме латеральных желудочков ( Momma S., Johanssen C.,Frisen J., 2000). Среди изолированных DIL-меченых эпендимальных клеток только 6% формировали нейросферы. Примерно 3 - 5 % клеток из этой суспензии окрашивались антителами к нестину или Notch 1.

10. Методические трудности получения клонов НСК из ЭСК

В зародыше весь пул НСК нервной трубки образован механизмом нейрональной индукции из эктодермы. Первые нестин+ НСК в нервной трубке возникали у зародышей мыши 7,5 дня развития. Подобно эпибласту, нервная трубка - это уникальная плюрипотентная ткань, где числом формирующихся клонов НСК реализуется трехмерный проект мозга. На уровне первичных клонов пролиферация определяется превалированием сигналов noggin, SHH над BMP-4 и BMP-7 механизмом “дефолта”. Дефолт в развитии –это автоматическая программа активации клеток после устранения ингибиторов (TGF-beta) ( Tropepe V., Hitoshi S., Sirard C. et al., 2001). Эти авторы наблюдали частичную трансформацию ЭСК в НСК в редкой культуре без фидера и сыворотки. Существенно, что ЭСК при этом переходе не подвергались предварительной модификации в клетки первичной эктодермы. Присутствие фидерного мезенхимального слоя сдвигало баланс сигналов в пользу других производных эктодермы (эпидермис кожи). Факторы сыворотки также чаще всего блокировали нейрогенез из ЭСК. Из отдельных клеток формировались клоны НСК с промежуточным фенотипом между ЭСК и нейросферами, выделяемыми из концевого мозга новорожденных животных. Единичные самообновляющиеся клоны НСК возникали при плотности 20 ЭСК/мкл и 1000 ед LIF. Другие добавки (B27 supplement, EGF, bFGF) без LIF не индуцировали образование клонов НСК. Этот путь получения нейросфер нерентабелен из-за малой доли (0,2 - 0,4%) образующихся колоний НСК. Показательно, что спектры мРНК исходных ЭСК и колоний НСК не претерпевали существенных изменений, кроме исчезновения мРНК Oct4. В клонах сохранены мРНК всех генов трех зародышевых листков и ранних master-genes рестрикционного созревания клеточных линий. Плюрипотентность клонов НСК позволяла активно химеризовать ткани зародыша-реципиента после имплантации в морулу. С этой целью были получены нейросферы, стабильно меченые цветными белками. Пересаженные НСК активно мигрировали, пролиферировали как в головном мозге, так и других органах зародыша ( Tropepe V., Hitoshi S., Sirard C. et al., 2001). В противоположность НСК зародыша, НСК из мозга взрослых животных, теряли способность к химеризации зародышей ( Clarke D.L., Johansson C.B., Wilbertz J. Et al.,2000).

Судьба изолированных ЭСК зависела в основном от эпигеномных синалов (noggin, notch, cerebrus, LIF, ВМР-4, ВМР-7). В культуре удалось понять причину блокировки нейрогенеза при высоких плотностях ЭСК - мешают меклеточные взаимодействия между слоями прогениторных клеток. Процент нестин+ клеток снижался на 75-85% в плотных культурах эмбриоидных телец. Многие авторы подтвердили, что в культуре ЭСК проще наладить получение нейронов

страница 49
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(11.12.2018)