медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

стимулятора внутриклеточного уровня цАМФ ( форсколина) и активатора протеинкиназы С ( форболового эфира –форбол-12-миристоил-13-ацетата). Эта «триада» вызывала появление 10-20% ТГ+ нейробластов. Однако путем двухнедельной инкубации в специальной среде для дифференцировки долю ТГ+ клеток удалось поднять до 75% ( Iacovitti L., Stull N.D., Jin H.,2001). In situ, т.е. в ходе эмбриогенеза ТГ+ нейробласты появлялись под влиянием других сигналов ( SHH и FGF8) ( Stull N.D., Iakovitti L., 2001). Эти данные показали, что лабораторные нейроны с выбранным профилем медиаторов реально получать «неприродным» альтернативным путем, в обход путей и сигналов эмбриогенеза мозга.

Другая стратегия наработки нейронов из линии ЭСК человека намечена сотрудниками фирмы Герон ( Carpenter M.K., Inokuma M.S., Denham J. et al.,2001). В суспензионной культуре ЭСК над фидером нарабатывают значительные массы эмбриоидных телец. Далее начальную дифференцировку запускают прикреплением агрегатов к подложке в среде с набором митогенов. Прикрепленные массы начинают расти незрелой тканью, в которой экспрессируются ранние гены нервной трубки. В ткани формируются клон-инициирующие клетки. Новообразованные клоны маркировались нестином, виментином, GFAP, PC-NCAM. Долю клонов НСК можно значительно увеличить путем подбора митогенов в селективной среде. При пересадке выращенной незрелой ткани, напоминающей нервную трубку, в мозг новорожденным мышам наблюдали интенсивную миграцию прогениторных клеток в разные отделы мозга с последующей дифференцировкой внейроны, глию и олигодендроциты ( Carpenter M., Inokuma M.S., Denman J., 2001)

Ретиноевая кислота оказалась первым незаменимым индуктором нейрогенинов или Neuro D на пути дифференцировки ЭСК в нейроны. Однако нет четких однозначных прописей получения холинэргических, ГАМК- или серотонинэргических нейронов на втором этапе дозревания бластных форм. Комбинации ростовых факторов, нейротрофинов и других индукторов в дучшем случае заканчивались смешанной дифференцировкой нейронов in vitro ( Takahashi J., Palmer T.D., Gage F.H., 1999). Существенно также, что нейрогенез in vitro, запускаемый ретиноевой кислотой, формировал нейроны из агрегатов, прикрепленных к поверхности крупных распластанных клеток ( по фенотипу –это клетки первичной эктодермы , либо нейромезенхимы )( Bain G., Kitchens D, Uao M. et al., 1995).

12. Получение линий НСК

Бессмертная линия стволовых клеток остается наилучшим лабораторным GМP- сырьем для биотрансплантатов в отсутствии фетальной ткани. Стандартно получаемые клетки из нестандартного биосырья незаменимы на стадии предклинических испытаний. Международные GМP-стандарты отдают предпочтение генетически однородным клеткам (Snyder E.,1994 ). (Таб 1) . Уже много десятилетий линии пассируемых плюрипотентных раковых клеток использовались для трансплантаций на животных. Наибольшее распространение получила линия РС12 , выделенная из феохромацитомы человека. Эти пассируемые мультипотентные предшественники являются клетками-дериватами нервного гребня. Линия CG9 была получена из глиомы человека . Геном клеток этой линии наделен плюрипотентностью, как и геном тератокарциномы Р19 . Но клетки этих линий не встриваются в бластоцисту и не интегрируются в нормальное развитие зародышей в отличие от других линий ЭСК.

Таблица 1 Преимущества GLP- линий НСК для предклинических испытаний

Преимущества над фетальной тканью Преимущество над первичной культурой нейронов Преимущества перед другими соматическими клетками

*Гомогенные клетки

*Нелимитированные количества

* Наличие банка ( т.е. доступность во времени и пространстве, легкость транспортировки)

*Контролируемое качество материала на уровне фенотипа и активности клеток

*Контролируемая пролиферация и дифференцировка клеток

*Стандартная однородность клеток

* Любые количества

*Легкость плановой заготовки трансплантата

* Воспроизводимый фенотип клеток

* Возможность выполнения всей экспериментальной работы на одной выборке клеток

* Доступность митотических клеток позволяет использовать методы генной модификации и инженерии

* Исходная однородность клеток позволяет более строго оценивать мультипотентность НСК и терапевтические эффекты на животных

*Позволяет оценить специфику вклада НСК по сравнению с самой процедурой трансплантации

*Иногда позволяет учесть вклад нейроспецифических генов, ростовых факторов или факторов регенерации

*Оценка специфики взаимодействий НСК с органами, особенно ЦНС

Линии НСК особенно важны в предклинических исследованиях на животных, имея превосходство перед гетерогенной первичной культурой . Без линий было бы невозможно выявить все возможные пути воздействия клеточного трансплантата на поврежденный мозг. Большой интерес вызвала условно бессмертная линия НСК, изолированная из нейроэпителия трансгенных зародышей мыши. Для иммортализации использовали температуро-чувствительный онкоген. В культуре при 20-25С клетки неограниченно пролиферировали, но переставили

страница 51
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(20.02.2019)