медицинский каталог




Эмбриональные стволовые клетки

Автор Репин В.С., Ржанинова А.А., Шаменков Д.А.

экспериментальной демиелинизации ( Taylor R.M.,Snyder E.Y.,1997). У 60 % мышей линии shiverer трансплантация НСК вела к устранению тремора – главного признака демиелинизации. При введении в мозг плюрипотентные клетки этой линии мигрировали и расселялись практически по всем регионам мозга. (Yandava B.,Billinghurst L.,Snyder E.Y., 1999). Существенно, что стволовые клетки наделены автоматикой цленаправленной миграции в зоны повреждения мозговой ткани. Детали этих исследований можно найти в патенте Снайдера ( No 5958767). Пересадки линии НСК человека, как и мышиной линии С17-2 использовали для доказательства терапевтической эффективности клеток с целью лечения наследственных заболеваний ЦНС. Например, пересадки НСК в мозг мышей с накаутом гексаминидазы ( модель болезни Тей-Сакса у детей) приводили к существенному снижению уровня токсичных Gm2 -ганглиозидов в реципиентной ткани мозга за счет доставки лимитирующего фермента (гексаминидазы) лизосом, удаляющего избыток накопленных фосфолипидов ( Lacorazza H.D., Flax J.D., Snyder E.Y. et al.,1996). Ранее было известно, что пересадки донорского костного мозга были эффективны в ликвидации последствий болезни в висцеральных органах, но не в ЦНС. Пересадки линий НСК были предложены в качестве прямой доставки нормальной аллели гена гексаминидазы для корррекции метаболизма фосфолипидов в головном мозге. Платформу будущей терапии формирует доказанная клеточная стабильная химеризация мозга реципиента донорскими НСК.

Линии НСК были изолированы не только из зародышей, но новорожденных и взрослых мышей ( Flax J.D.,Aurora S.,Yang C. еt al, 1998). По той же стратегии была выделена НСК из перивентрикулярной ткани фетального мозга. Сперва получали первичную клоногенную культуру НСК, затем отбирали наиболее быстро пролиферирующие клоны, которые трансфицировали конструкцией из рестровирусного вектора и двух генов : v-myc ( для иммортализации) и lac-z ( микробный ген бета-галактозидазы для визуализации ). Первый ген был поставлен под промотер нестина, второй – под промотер неомицина. З линии были получены из трех разных быстро растущих клонов. Клональность линии подтверждалась единственным местом вставки v-myc в геном. Линии длительно пассировали без изменения генотипа (анеуплоидия) и фенотипа (маркеры НСК). Сохранялась плюрипотентность клеток in vitro. У линий не была выявлена туморигенность. Важнейшей характеристикой наиболее изученных линий НСК оставалась пластичность: большинство трансплантируемых клеток дифференцировались в нейроны и глию, преобладающие в месте нахождения трансплантата. Вновь подтвердилась первостепенная значимость сигналов микроокружения в судьбе клеточного трансплантата (Vescovi A.L., Snyder E.Y., 1999). Первые заметные результаты эта лаборатория получила, используя пересадку линии 17.2 в мозжечок мутантным мышам meander tail. Эти животные имели наследственные дефекты костной системы и аномалии архитектоники в мозжечке. Основу мозжечковых расстройств составляли дефекты миграции незрелых гранулярных клеток. Это вело к двигательным расстройствам. Пересадки клеток линии 17.2 восстанавливали клеточную организацию внутреннего и внешнего гранулярного слоя. Пересадки позволили выяснить как функционирует мутантный mea ген в мозжечке, путем сопоставления коррекции мозжечковых расстройств с гистологической картиной поэтапного восстановления цитослоев в мозжечке ( Rosario C.M., Yandava B.D., Kosaras B. et al., 1997). При трансплантации в боковые желудочки или субвентрикулярное пространство мозга новорожденных клетки активно мигрировали в разные отделы мозга по преформированным путям. Трансплантация этих клеток в герментативный слой мозжечка приводила к миграции, дифференцировке и встраиванию прогениторных клеток в наружний гранулярный слой. Реже из донорских клеток формировались клетки Пуркинье и олигодендроциты. Только некоторые линии НСК отличались высокой скоростью миграции и высоким индексом встраивания в преформированный гранулярный слой. Пересадки первичной суспензии клеток фетального мозжечка в мозжечок иммунодефицитных животных были более эффективными в терминах количества и эффективности восстановления цитоархитектоники слоев донорскими клетками (Pundt L.L., Jorn E.A., Low W.C., 1997). Возможно, что причиной высокой приживляемости клеток является исходный синергизм взаимодействия гетерогенных прогениторных/бластных клеток, созревающих в разном направлении. Функциональное встраивание донорских клеток доказывалось необратимой утерей экспрессии (v-myc) и клеточных делений. Репаративные способности этой линии были сперва апробированы на линии мутантных мышей meander, имевших недоразвитие гранулярного слоя нейронов в передней доле мозжечка. Введение донорских НСК в паренхиму вело к направленной миграции и аккумуляции прогениторных клеток вдоль границы внутреннего гранулярного слоя, где завершалась их дифференцировка. Донорские клетки после встраивания визуализировали с помощью маркерной бета-галактозидазы. Недостатком линий в

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66

Скачать книгу "Эмбриональные стволовые клетки" (12.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(11.12.2018)