медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

живых дрожжей хорошо заметны крупные прозрачные вакуоли, занимающие иногда центральное положение.

С представителями аспорогенных дрожжей, размножающихся только почкованием и не образующих спор, можно познакомиться на примере Тоги la lactis (молочные дрожжи). Клетки Torula lactis мелкие, их диаметр около 5 мкм.

Размножение у дрожжеподобнЫх организмов может происходить также в результате распада гиф на отдельно ные клетки—оидии или артроспоры, как у Geotrichum candldum (Oldtum lactis), который изучается в процессе молочнокислого брожения (стр. 92).

Коллекцию культур следует пересевать каждые 2— 3 месяца на свежие питательные среды; бактерии и актиномицеты на мясо-пептонный агар, дрожжевые и плесневые грибы на сусло-агар. За 2—3 дия до занятий культуры пересевают в пробирки (бактерии и актиномицеты) или чашки Петри (грибы) из расчета две пробирки каждой культуры и I—2 чашки Петри на группу студентов в 10—15 челввек.

При проведении занятий необходимы микроскопы и все принадлежности к ним, предметные и покровные стекла, бактериологические петли (иглы), препаровальные иглы, свежий 5%-ный фуксин.

1 СТРОЕНИЕ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ (ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ]

Микробная клетка — сложная живая система, характеризующаяся высокой степенью упорядоченности составляющих ее структур. Каждая структура выполняет определенное жизненное назначение. Взаимодействие структур обеспечивает существование клетки, ее целостность.

Для изучения внутреннего строения клеток применяют специальные методы окраски (цитохимические методы исследования). Многие из этих методов преследуют диагностические цели. По форме клетки микроорганизмы не слишком разнообразны, и в ряде случаев, чтобы установить принадлежность микроба к тому или иному роду и виду, необходимо провести специальное окрашивание той или иной структуры (или вещества, накапливающегося в клетке).

3. ОКРАСКА КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ ПО ГРАМУ

Датский ученый Грам в 1884 г. предложил метод

дифференциации микробных клеток, основанный на различии в химическом составе клеточных оболочек. Сущность метода заключается в том, что в клетках одних видов микроорганизмов образуется нерастворимое в спирте соединение йода с основным красителем, у других видов это соединение появляется времени!? и преде

41

обработки спиртом растворяется. Первые микроорганизмы называются грамположитсльными, вторые — грам-отрицательными.

Техника окраски по Граму. На хорошо обезжиренное предметное стекло наносят три тонких мазка разных культур микроорганизмов (два из них — контрольные с заведомо известным отношением к окраске по Граму). Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение 1 мин феноловым раствором генциана фиолетового (или кристаллического фиолетового), держа стекло в несколько наклонном положении. Сливают краситель и, не промывая препарат водой, наносят на него раствор Люголя на 1 мин (до полного почернения мазка). Стекло и в этом случае лучше держать в наклонном положении. Препарат (не промывая водой) обрабатывают, непрерывно покачивая, 96%-ным спиртом в течение 15—20 с. Время обесцвечивания очень существенно, при превышении определенного срока обесцвечиваются и грамположитслыше клетки, при недостаточном сроке обработки препарат окажется перекрашенным в дальнейшем.

Промыв препарат водой, его окрашивают фуксином Пфейфера в течение 1 мин. Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные — имеют только цвет дополнительной окраски (фуксина).

Результаты окраски по Граму зависят от возраста культуры. В старых культурах мертвые клетки всегда окрашиваются грамотрицательно. Некоторые бактерии (коринебактерии, протей) окрашиваются грамвариа-бельно (часть клеток как грамположительные, а часть— как грамотрицательные).

В качестве объектов для окраски клеток микроорганизмов по Граму рекомендуются дрожжи, Bacillus mesenlericus или Bacillus subtilis (грамположительные) и кишечная палочка Escherichia coll (грамотрицатель-ная).

Метод ГРАМА В МОДИФИКАЦИИ СИНЕВА. На фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги шириной 3 см, предварительно пропитанную 1%-ным спиртовым раствором кристаллического фиолетового и высушенную (в высушенном виде бумага может долго храниться). На бумагу наносят 2—3 капли воды и оставляют ее на препарате 2 мин.

42

В дальнейшем окраску ПРОВОДЯТ по ВЫШЕОПИСАННОЙ методике. Модификация Синева нашла широкое применение в практике.

Метод Грама в модификации Калины. На предметное стекло наносят небольшую каплю дистиллированной воды, вносят В нее минимальное количество клеток микроорганизмов и петлей добавляют 0,5%-ный спиртовой раствор кристаллического фиолетового. Суспензию равномерно распределяют на площади I см2, подсушивают и фиксируют однократным проведением над пламенем Горелки. После этого препарат в течение 1 мин обрабатывают реактивом, содержащим 10 мл 5%-ного раствора фуксина Пфейфера, 10 мл 10%-кого раствора йода, 10 мл ацетона и 70 мл 0,5%-кого раствора йодист

страница 15
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(22.04.2019)