медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ого калия. Затем препарат опускают на одно мгновение в этиловый спирт (96%-ный) и быстро высушивают фильтровальной бумагой.

РЕЦЕПТЫ красителе! И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РАСТВОРОВ ДЛЯ ОКРАСКИ

по Граму. 1. Феноловый раствор гетмана фиолетового: генциан фиолетовый—1 Г, спирт 96%-ныИ— 10 ил, ФЕНОЛ кристаллический — 2 г, ВОДА дистиллированная — 100 мл.

В пек СПОРЫХ случаях ПРИМЕНЯЮТ спиртовой РАСТВОР геицнаиа ФИОЛЕТОВОГО: ГЕНЦИАН ФИОЛЕТОВЫЙ (или КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ФИОЛЕТОвый) — 1 Г, СПИРТ 96%-ный (РЕКТИФИКАТ) — 100 мл, ГЛИЦЕРИН — 5 МЛ. Бутыль СО смесью ставят в термостат на 24 Ч (можно и дольше), затем фильтруют.

Й. Раствор Люголя (йодистый калий — 2 Г, ЙОД кристаллический—1 г, вода дистиллированная — 300 мл). Вначале готовят концентрированный раствор ЙОДИСТОГО калия в 5 ИЛ воды, в нем растворяют йод, потом добавляют ВОДУ до 300 ил.

3. СПИРТ 96%-ный.

4. ФУКСИН ПФЕЙФЕРА (ВОДНЫЙ РАСТВОР КАРБОЛОВОГО ФУКСИНА Ци-ЛЯ): 1 мл КАРБОЛОВОГО ФУКСИНА ЦИЛЯ (рецепт ПРИВЕДЕН на стр. 46) и 9 ил дистиллированной воды.

4. ОКРАСКА СПОР У БАКТЕРИЙ

Споры бактерий по сравнению с вегетативными клетками обладают высокой устойчивостью к неблагоприятным условиям внешней среды. Они представляют собой округлые, овальные или эллипсовидные образования. Если диаметр споры не превышает диаметра клетки, в которой образуется спора, клетка называется бациллярной, если превышает, то В зависимости от расположения споры (В центре или на конце клетки) — клострйдиальной или п л е к т р и д и а л ьн о й. В бациллярной клетке спора может размещаться и в

43 центре клетки (центральное положение) и на конце (терминальное), и ближе к одному из концов (субтер-иинальное). При наблюдении за живыми слорообразуюшими бактериями их споры можно различить по более сильному преломлению световых лучей. Споры кислотоустойчивы и с трудом окрашиваются красителями. Объясняется это наличием плотной оболочки, низкой концентрацией свободной воды и высоким содержанием липидов.

В препаратах, окрашенных простыми способами или по Граму, споры остаются бесцветными (негативная окраска).

В связи с особенностями физико-химического состава спор и плотной малопроницаемой оболочкой при окраске их применяют сначала химические вещества, изменяющие структуру оболочки. Однако при последующем прокрашивании споры одновременно прокрашивается и цитоплазма клетки, поэтому под микроскопом последняя выглядит однородно окрашенной. Чтобы добиться прокраски только споры, следует такой «перекрашенный» препарат частично обесцветить, отнимая краситель у цитоплазмы и оставляя его в споре. Это достигается довольно просто, так как адсорбированный спорой краситель удерживается прочнее, чем краситель, адсорбированный цитоплазмой клетки.

Таким образом, все способы окраски спор основаны на одном принципе. Сначала споры протравливают разными веществами — хромовой, соляной, серной, уксусной кислотами, аммиаком, едким натром или перекисью водорода, затем окрашивают клетку со спорой при иагревании, наконец, обесцвечивают цитоплазму и дополнительно окрашивают ее контрастным красителем.

Метод Цнля — Нильсена в модификации Мюллера. Мюллер, модифицировав известный метод Циля — Нильсена, применяемый обычно для выявления кисло» тоустойчивости бактерий (дифференциальной окраски

микобактерий и некоторых близких к ним микроорганизмов), связанной с особенностями химического состава их оболочки, предложил использовать его для окраски спор бактерий.

До фиксации мазка бактерий на пламени препарат готовят обычным способом (стр. 23). Далее на фиксированный в пламени и остывший препарат наносят

44

5%-иый раствор хромовой кислоты. Через 5—10 мин ее смывают водой. Препарат накрывают полоской- фильтровальной бумаги, обильно смачивают бумагу карболовым фуксином Циля. Подогревают препарат над пламенем горелки до появления паров (не до кипения), потом отводят его в сторону и добавляют новую порцию красителя.

Так продолжают в течение 7 мин. При этом важно, чтобы краситель испарялся, но бумага не подсыхала. После охлаждения ее снимают, препарат промывают водой и тщательно промокают фильтровальной бумагой. В результате такой обработки клетки со спорами равномерно прокрашиваются. Далее обесцвечивают цитоплазму клеток, но не опоры, обрабатывая клетку 1%-ным раствором соляной или серной кислот в течение 15—30 с. При приготовлении препарата спор Bacillus mycoides или Bacillus mesentericus рекомендуется обесцвечивать цитоплазму 16—18 с (мерно считая вслух от 21 до 37—40). При превышении времени обесцвечивания может обесцветиться и спора. Затем препарат промывают водой и окрашивают метиленовым синим в течение 2 мин. Если все операции проделаны правильно, окраска получается контрастной и споры, окрашенные в ярко-красный цвет, четко выделяются на голубом фоне цитоплазмы.

Метод Пешкова. На фиксированный в пламени препарат наливают метиленовый синий Леффлера, доводят его до кипения и кипятят на протяжении 15—20 с, держа над пламенем горелки. Препарат промывают водой и докрашивают в течение 30 с 0,5%-ным водным раст

страница 16
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(20.04.2019)