медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

вором нейтрального красного. Снова промывают, подсушивают и исследуют препарат с масляной иммерсией объектива. Споры получаются голубые или синие, цитоплазма— розовая.

Метод Ожешко. На высушенный, но нефиксированный препарат наливают 0,5%-ный раствор НС! и подогревают до появления паров 1—2 мин. Остудив, сливают кислоту, осторожно промывают препарат водой, сушат на воздухе, фиксируют на пламени.

Далее препарат обрабатывают по методу Циля — Нильсена (окраска карболовым фуксином через фильтровальную бумагу с подогреванием, обесцвечивание цитоплазмы кислотой и ее докрашивание метиленовым синим).

45

\

РЕЦЕПТЫ красителей И ШЮМОГАКЛЬНИХ РАСТВОРИВ ДЛЯ ОКРАСКИ спор. I. Карболовый фуксин Циля; фуксин основной—) г, карболовая кислота кристаллическая (фенол) — ft г, спирт 96%-ный — 10 мл, глицерин — несколько капель, вода дистиллированная —

100 мл.

2. Метимновый синий Леффмра 30 мл насыщенного спиртового раствора метилеиового синего смешивают со 100 ил 0,01 %-него раствора гидроокиси калия. Насыщенный спиртовой раствор метилеиового синего готовят следующим образом: 1,6 г метилеиового синего растворяют в 100 мл 95%-ною sтипового спирта.

3. Насыщенный водный раствор метилеиового синего: 2 г красителя и 100 мл дистиллированной воды.

4. Храмовая кислота. 5%-вый раствор.

5. Соляная (или серная) кислота, 1%-иый раствор.

Для исследования спор хорошими объектами могут служить Bacillus mesenteriais и Bacillus mycoides в возрасте четырех суток.

5. ОКРАСКА КАПСУЛ

Некоторые виды бактерий образуют слизистые капсулы. При обычных методах окраски они остаются бесцветными. Для выявления их применяют специальные негативные методы окраски (стр. 27).

Негативный метод Бурри. Каплю туши помещают иа хорошо обезжиренное смесью спирта с эфиром предметное стекло и смешивают с каплей жидкости, содержащей бактерии. При помощи покровного стекла распределяют мазок тонким слоем по поверхности предметного стекла. После того как препарат высохнет (на воздухе), его рассматривают с иммерсионной системой микроскопа. На темно-дымчатом фоне ясно видны неокрашенные капсулы и клетки бактерий.

Метод Гинса. Приготовляют негативно окрашенный по способу Бурри препарат и фиксируют его 7%-ным водным раствором сулемы в течение 2—3 мин', или метиловым спиртом — 5 мин, или смесью спирта и эфира (жидкость Никифорова) на протяжении 10—15 мин, промывают водой к окрашивают в течение 3—5 мин карболовым фуксином Циля, разведенным водой в соотношении 1:3. Препарат промывают водой, высушивают и ми-кроскопируют с иммерсией. При микроскопировании на темном фоне препарата контрастно выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых заключены бактерии ярко-малинового цвета.

Рецепт приготовления туши. Одну часть туши смешивают с девятью частями дистиллированной воды и стерилизуют при 1 атм в течение 30 мни в пробирках, закрытых ватными пробками. Вместо

46 стерилизации можно добавлять к туши несколько капель формалина. Подготовленную таким образом тушь выдерживают две недели, пока все взмученные частицы не осядут на дно, Для приготовления препарата осторожно берут только верхнюю часть отстоявшейся жидкости.

Для исследования капсул наиболее удобно использовать клетки азотобактера.

4. ОКРАСКА ЖГУТИКОВ

Жгутики микроорганизмов — тончайшие образования (0,02 — 0,04 мкм), легко отрывающиеся от клетки при обработке. Это затрудняет их исследование. В основе методов окрашивания жгутиков лежит обработка их протравителям!, в результате которой они увеличиваются в объеме.

Подготовка материала. Подготовку культуры ведут за несколько суток до просмотра. Рекомендуется ежедневно несколько дней подряд делать пересевы на свежую питательную среду (в жидкую среду или в конденсационную воду свежей скошенной агарнзованной среды). Кроме того, в день просмотра можно брать петлей материал и переносить в пробирку с 5—6 мл стерильной водопроводной воды, нагретой до 37°С. Не рекомендуется болтать петлей в воде, бактериальная масса сама должна в течение 30—60 мин разойтись в ней. Прежде чем приступать к работе, необходимо проверить подвижность клеток в висячей капле. В случае отсутствия подвижности следует оставить пробирку в термостате иа 1Для приготовления препаратов необходимы совершенно чистые предметные стекла. Их кипятят в растворе двухромовокалиевой соли в крепкой серной кислоте, затем дважды промывают в растворе едкого натра. После этого стекла промывают водой и помещают для хранения в банку с 96%-ным спиртом. Перед приготовлением мазка следует сильно нагреть ту сторону стекла, на которую будет нанесен мазок, но наносят его на охлажденное стекло.

Метод Леффлера. Суспензию бактерий наносят на предметное стекло и сушат при комнатной температуре. Допускается фиксация препарата быстрым одноразовым проведением через пламя. Далее препарат обра батывают протравителем в течение 3—5 мин, нагревая его до появления паров, или 15—20 мин при комнатной температуре, потом промывают сильной струей диет илший в осадок краситель). Если клетки бактерий не ок

страница 17
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(18.08.2019)