медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

расились в красный цвет, их докрашивают метилено-вым синим.

Для приготовления парарозанилиив необходимы следующие растворы: I. 1,5%-иый раствор NaCl в двстыдшроваиной воде. 2. 3%-ный раствор таниновой кислоты ? дистиллированной воде (раствор должен быть светло-желтым). 3. 0,9%-кый раствор пара-роааиилниацетата иди 0,3%-ный раствор парарозанклингидрохлори-да в 96%-ном этиловом спирте. Для их растворения требуется несколько часор даже при взбалтывании. Вместо соли розанилина можно применит основной фуксин в виде 1,2%-ного раствора в 96%-ном этиловом спирте. Для приготовления красителя смешнают равные объему этих трех растворов и смесь хранят в плотно закупоренной склянке. В ней краситель сохраняет свойства в течение нескольких недель при •температуре 4° С l месяцев и даже лет при -10, -Ж С

Метод серебрения жгутиков по Морозову. Готовят три реактива: 1) 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл

формалина, 100 мл дистиллированной воды; 2) 5 г танина, 1 мл жидкой карболовой кислоты (фенола), 100 мл дистиллированной воды; 3) 5 г кристаллического азотнокислого серебра (AgN03) растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

К 80 мл раствора серебра (20 мл отливают) по каплям приливают водный раствор аммиака (нашатырного спирта), пока не растворится образовавшийся осадок и останется легкая опалесценция. Если аммиака будет добавлено слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора серебра надо по каплям приливать раствор до получения нужной опалесцвнции. Для окраски препарата раствор серебра разводят дистиллированной водой в соотношении 1 ; 100, Техника окраски следующая: на одну минуту на препарат наливают первый реактив, сливают, промывают водой, наливают второй реактив, подогревают на слабом пламени до появления паров (1 мин), тщательно промывают водой, 1—2 мин при подогревании обрабатывают препарат третьим реактивом до появления темно-коричневой окраски мазка, тщательно промывают водой, высушивают и микро-скопируют с иммерсией.

Окраска жгутиков относится к числу наиболее тонких методов исследования строения микробной клетки, поэтому для практических занятий лучше воспользоваться заранее приготовленными, наиболее удачными препаратами.

4 Тдор Е, 3, *?

f. ОКРАСКА ЯДЕРНОГО МЩЕСТВА БАКТЕРИЙ

О наличии ядра (нуклеуса) при цитохимических исследованиях судят по реакции на дезоксирибоиуклеино-вую кислоту (ДНК), которая входит в его состав.

Метод Романовского — Гимза, Этим методом в клетках микроорганизмов одновременно выявляют ядерные вещества и волютин. Препарат фиксируют в течение 5 мин метиловым спиртом или фиксатором Карнуа . В последнем случае для удаления следов уксусной кислоты препарат промывают спиртом и тщательно высушивают на воздухе. Окрашивают препарат красителем Романовского — Гимза ' в течение суток, затем споласкивают слабощелочной (рН 7,2) водой, высушивают и микроскопируют. Ядерные вещества окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, цитоплазма — в слабо-розовый.

Реакция Фельгена. Ее применяют для окраски ДНК. При слабом кислотном гидролизе ядерных нуклеопро-теидов происходят отщепление пуриновых и пиримиди-новых оснований, ведущее к высвобождению деэоксири-бозы, входящей в ДНК. При гидролизе дезоксирибозы она переходит в р-гидроксилевулиновый альдегид, который взаимодействует с сернистой частью бесцветной фуксин-сернистой кислоты, выделяя фуксин (окрашенный в красный цвет). В результате ядерные вещества становятся окрашенными.

Препараты бактерий обрабатывают фиксатором Карнуа 5 мин, промывают абсолютным спиртом, гидролиз у ют в течение 7 мин в растворе 1 н. НС1, подогретой до 60°С, погружают на 1—2 мин в холодную 1 н. НО и переносят в фуксннсернистую кислоту (реактив Шиф-фа) на 3—4 ч.

Препараты последовательно промывают в трех кюветах с сернистой водой, по 20 мин в каждой кювете, затем споласкивают дистиллированной водой, высушивают и микроскопируют. Ядерное вещество окрашено в фиолетовый цвет.

8. ОКРАСКА ВКЛЮЧЕНИЙ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ

Окраска волютина (метахроматических зерен). Термин «волютин» предложен Мейером, обнаружившим его впервые у бактерий Spirillum volutans. Волютин — запасное фосфор- и азотсодержащее вещество, производное

нуклеиновой кислоты. Характерное свойство волютина— его метахромазия — способность окрашиваться в иной цвет, чем цвет окрашивающего вещества (мстиленовый синий окрашивает волютин в фиолетово-красный цвет).

Метод Нейссера. Фиксированный на пламени мазок окрашивают в течение 1—2 мин раствором Нейссера I (смешивают 2 части раствора А с одной частью раствора Б; раствор А состоит из 1 г метилеиового синего» 20 мл 96%-ного спирта, 50 мл ледяной уксусной кислоты и 1 л дистиллированной воды; раствор Б — из 1 г кристаллического фиолетового, 10 мл 96%-ного спирта, 300 мл дистиллированной воды; оба раствора смешивают непосредственно перед употреблением). Краситель сливают и препарат окрашивают в течение 1—2 мин раствором Нейссера III (1 г хризоидина, 300 мл дистиллированной воды).

Цитоплазма бактерий окрашивается в желтый, а волютин — в темно-синий, почти

страница 18
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.02.2019)