медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

черный цвет.

Метод Мейера. Готовят параллельно два препарата, фиксируют их на пламени, в течение 10 мин окрашивают метиленовым синим Леффлера. Затем один препарат погружают на 5 мин в 1 %-ный раствор серной кислоты (препарат К), другой —на столько же в 4%-ный водный раствор КОН (препарат Щ).

Не промывая, препараты подсушивают фильтровальной бумагой и докрашивают 0,25%-ным раствором светлого зеленого или хризоидина. Затем промывают водой и высушивают. На препарате К цитоплазма бактерий окрашена в желто-коричневый цвет, включения волютина — в вишнево-красный. На препарате Щ гранулы волютина обсцвечены.

Окраска гликогена. Гликоген—это углевод, животный крахмал (полисахарид). Часто он накапливается в клетках дрожжей, бацилл. Для обогащения дрожжевых клеток гликогеном их выращивают на солодовой среде.

На чистое предметное стекло наносят небольшую

каплю суспензии микроорганизма и к ней добавляют

4 51

такую же каплю раствора йода в йодистом калии (7 г йода и 20 г йодистого калия в 100 300 мл дистиллированной воды). Сверху помещают покровное стекло, избыток жидкости удаляют фильтровальной бумагой. Препарат просматривают с масляной иммерсией («а покровное стекло наносят каплю масла).

Включения гликогена хорошо исследовать в клетках Saccharomyces cerevisiae и Bacillus mycoides 1—2-су-точного возраста.

Окраска гранулезы. Гранулеза — углевод, крахма-лоподобное вещество. В больших количествах накапливается в клетках маслянокислых бактерий (Clostridium butyricum) перед спорообразованием.

В небольшую каплю суспензии маслянокислых бактерий добавляют такую же каплю раствора Люголя, закрывают покровным стеклом, удаляют избыток жидкости фильтровальной бумагой, на покровное стекло наносят каплю масла и просматривают под микроскопом с иммерсионной системой.

В качестве объекта следует воспользоваться накопительной культурой маслянокислых бактерий, Ее получают таким образом: за 3—4 суток до занятий в пробирки помещают мелконарезанный картофель с шелухой (7з пробирки), на кончике ножа вносят мел и заливают доверху водопроводной водой. Пробирки помещают в водяную баню и нагревают при 70Х в течение 10 мин, затем охлаждают и ставят в термостат ' при 30°С.

Для приготовления препарата маслянокислых бактерий берут пипеткой каплю суспензии из придонного слоя .жидкости.

Окраска жира. Жир содержится в клетках практически всех видов микроорганизмов; особенно много его накапливается при старении культуры.

На предметное стекло наносят небольшую каплю 40%-ного раствора формалина. Петлей в нее вносят культуру микроба. Формалин убивает клетку и разрыхляет оболочку. Через 5 мин в эту же каплю добавляют небольшую каплю метиленового синего, а спустя 10 миш каплю СУДАНА 111 (растворимого в жире красителя, индикатора жироподобных веществ). Образовавшуюся общую каплю накрывают покровным стеклом, удаляют избыток жидкости фильтровальной бумагой и микрос копируют препарат с иммерсией. Цитоплазма

5?

клеток окрашивается в синий цвет, включения жира — в розово-оранжевый.

Объекты для исследования — старые культуры дрожжей, Bacillus mycoides, Bacillus megaterium.

Судан Ш готовят следующим образом: 0,1 г Судана Ш растворяют в 200 мл 96%-иого спирта или концентрированной полочной

Глава V ПИТАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ

?, ЗНАЧЕНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ

В состав клеток микроорганизмов входят органогены (С, О, Н, N), зольные элементы (Р, S, К, Mg, Са, 1-е)

и микроэлементы, которые в малых дозах стимулируют рост клеточной массы, а в больших тормозят его. К ним относятся Zn, Мп, В, Си, Мо, Со и др.

В сухом веществе клеток содержится: углерода — 50%, азота — 10-13, водорода—8, кислорода — 20, Р205 — 4, К20 — 3, SO,— 1. MgO —0,8, CaO— 1, FejOa — 0,08%, микроэлементов — следы.

Чтобы установить значение отдельных питательных элементов для развития микроорганизмов, можио поставить опыт с грибом Aspergillus niger.

Готовят несколько вариантов питательных сред, из которых один — полная питательная среда без микроэлементов (Aspergillus niger развивается на этой среде хорошо), все остальные — та же среда с исключением того или иного элемента или с добавлением микроэлемента.

По росту гриба на питательных средах судят о значении исключаемого элемента или добавленного микроэлемента для развития граба.

Варианты питательных сред следующие.

1. Полная питательная среда без микроэлементов (в %):

0,05

0,01

сахароза 10.0 MffSO, ....

NH.NO, ...... 0,3 FESO« ....

KHSPO« ал

2. Та яке среда без углерода. Из среды исключают сахарозу (для компенсации осмотической активности

СРЕДЫ МОЖНО внести СООТВЕТСТВУЮЩЕЕ ПО ОСМОТИЧЕСКОму эквиваленту количество хлористого натрия).

3. Та же среда без азота. Из среды исключают NH4NOa.

4. Та же среда без фосфора, КНгР04 заменяют другой солью, например КС1 , не содержащей фосфора, но включающей эквивалентное количество калия.

5. Та же среда без калия. КН2Р04 заменяют эквивалентным количеством NaH»P04.

6. Та же среда без серы, MgS0

страница 19
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(16.02.2019)