медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

4 и FeS04 заменяют эквивалентными количествами MgCl2 и FeClj (закис-ную соль железа можно заменить окисной).

7. Га же среда без магния. MgS04 заменяют эквивалентным количеством Na2S04.

8. Та же среда без железа. FeS04 заменяют эквивалентным количеством Na2S04.

9—11. Та же среда с добавлением микроэлементов, В одном варианте в состав среды вводят ZnS04, в другом — MnS04, в третьем — Н3В03 {в концентрации 0,01%).

Перед составлением питательных сред нужно рассчитать эквивалент — процент тех солей, которые вводят -вместо исключаемых.

ПРИМЕР РАСЧЕТА. Вариант СРЕДЫ бе» ФОСФОРА. КН,1Ю4 заменяют KCI.МОЛЕКУЛЯРНАЯ МАССА КН1РО4 — 130(39+2+31+64). А КС1 —74(39+35), RHjP04 нужно было ВВЕСТИ в СОСТАВ среды 0,2%.

СНАЧАЛА определяют процент заданного калия в среде (х). Его вычисляют нэ ПРОПОРЦИИ;

136 — 0,2 _ 39.ОД

39 — х 136 "

и=0,1%.

Затем устанавливают эквивалентное количество КС! (U):

136,

74.39.0,2%

136.39

U - 74

Таким образом, для определения эквивалентного процента замещающей соли (U) в нашем опыте нужно молекулярную массу ее умножить на процент заменяемой холи и разделить на молекулярную массу последней.

Состав питательной среды в четвертом варианте (без фосфора) такой же, как и в первом, но К,Н8Р04 заменяют КО.

При постановке опыта для каждого варианта рассчитывают количество всех веществ в граммах на 30 мл среды. Так как Aspergillus niger — аэробный организм, то опыт ставят в колбах Эрлеимейера емкостью 75— 100 мл.

ПРИМЕР РАСЧЕТА. ЗАДАНО создать КОНЦЕНТРАЦИЮ NH|NC% — 6,3%, следовательно на 100 МЛ НАДО взять С,3 г соли, тогда НА 30 мл ПОТРЕБУЕТСЯ ее х Г:

30.0,30,09 г.

.Соответствующее КОЛИЧЕСТВО веществ на 30 МЛ среды НАБИРАЮТ объемно: САХАРОЗУ из 20%-ного, МИКРОЭЛЕМЕНТЫ из 1 % ного, А ВСЕ ОСТАЛЬНЫЕ соли из 10%-них РАСТВОРОВ. НАВЕСКУ МЦГЧ'ОЗ — 0,09 Г набирают из 10%-НОГО раствора. Поэтому НАДО определить, СКОЛЬКО миллилитров 10% НОЙ СОЛИ надо взять, чтобы внести соответствующую навеску,

'- В 10%-нон растворе соли в 100 мл содержится 10 г NH4NO1, а 0,09 Г МЦМО» В У МЛ 10%-НОГО раствора,

Y— -—j^,Q9=0,9 МЛ 10%-НСГО РАСТВОРА MUNO,.

Подобным образом рассчитывают все ингредиенты для каждого варианта в миллилитрах и вносят в колбу. Далее миллилитры суммируют и вычитают из 30 мл. Полученная разность показывает, сколько дистиллированной воды надо добавить.

Все необходимые соли И сахарозу вносят тщательно отмытыми пипетками (сначала ИХ моют под струей водопроводной воды, затем споласкивают дистиллированной водой).

Целые миллилитры вносят градуированной пипеткой на 10 мл с делениями 0,1 мл, а десятые и сотые доли — микропипеткой на 1 мл с делениями 0,01 мл.

30 мл среды в колбе заражают спорами гриба Aspergillus niger. Каждую колбу закрывают ватной пробкой и прикрепляют этикетку с указанием варианта.

Среды перед внесением спор гриба не стерилизуют, так как высокая концентрация сахара и кислая реакция (за счет кислой соли КН2РО4) будут, препятствовать росту бактерий. Каждый вариант желательно ставить в двукратной повторности. Опытные колбы помещают в термостат при 28—30°С.

55

Спустя 7 суток проводят анализ опыта. Выросшую пленку в первом варианте берут за стандарт. Обычно в этом варианте рост гриба хороший (пленка мощная). С первым вариантом сравнивают все остальные. Оценка роста гриба визуальная.

Для более точной оценки роста гриба в каждом ва--рианте пленки era можно высушить при 105°С до постоянной массы. Первый вариант принимается за 100%.

На средах с исключением того или иного элемента (особенно если в нем большая потребность) гриб не растет (или растет очень слабо). Если элемент требуется в очень небольших количествах (например, FeS04 — 0,01 %), то исключение его мало сказывается на росте клеточной массы, так как гриб использует примеси этого элемента в реактивах. При полном выделении из питательной среды необходимого элемента гриб развиваться не будет.

Материалы и ОБОРУЖОААИМЕ. Культуры гриба Aspergillus niger, 20%-ный раствор сахарозы, 1 %-ИЫЕ растворы ZnSO«, Н,ВО», MnSCU н 10%-ные NH4NO», КН,ГОЧ, КС1, NoH.PO,, MgSO,. MgCI*

FeS04, FeClb колбочки на 75—100 мл, цилиндры иа 100 мл, градуированные пипетки на 10 мл, градуированные микрохшиеткя на 1 мл, препаровальные иглы, вата и бумажные этикетки.

J. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СКД

При составлении питательных сред для микроорганизмов необходимо учитывать их потребность в элементах питания. По составу питательные среды подразделяются на две группы: естественные (натуральные) н синтетические.

Естественными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный химический состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани, солод, дрожжи, овощи, навоз, почва, вода морей, озер и минеральных источников. Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в этих средах имеются, обычно, все компоненты, необ

страница 20
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(16.02.2019)