медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

с ватной пробкой соединяют с насосом (масляным или водоструйным) и выкачивают воздух. Так как внутри фильтра давление будет ниже, чем над его поверхностью, жидкость под давлением будет проходить через фильтр в приемник. Бактерии останутся с внешней стороны фильтра.

Неудобство этого метода заключается в медленной фильтрации и необходимости частой очистки фильтров.

Материалы и оборудование. Мнсо-пептоииый бульон, агар-агар, лакмус красный, фенолфталеин, брсмтмыолблау, фарфоровые пластике с лунками -ми чашки, стеклянные палочки, 20%-ный NASCOI, пробирки ш штативах (для разливки агара), воронки, вата, чашки Петри, пнлеткя Мора на 1 мл, бумага для обертывания чашек н пи-петок, колбы емкостью 250 мл, суровые нмтки (для демонстрации выставить пептон, желатину, агар-агар).

Глава VI

УЧЕТ ЧИСЛЕННОСТИ БАКТЕРИЙ И ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ

1. УЧЕТ ЧИСЛЕННОСТИ БАКТЕРИЯ В ПОЧВЕ МЕТОДОМ

ПИТАТЕЛЬНЫХ ПЛАСТИН (МЕТОД КОХА]

Почва обильно населена микроорганизмами и. служит основным поставщиком их во все другие естественные среды.

В связи с большой гетерогенностью состава почвы для учета численности микроорганизмов в ней с исследуемого участка берут среднюю почвенную пробу (стр. 146). Пробу берут стерильным буром, стерильной лопатой и стерильным ножом в заранее подготовленные стерильные полиэтиленовые, пергаментные мешки или в стерильные шнрокогорлые банки, закрывающиеся корковыми пробками, обернутыми ватой. Бур, лопату и нож стерилизуют (фламбированием) в поле перед взятием образца. Тщательно отмытые предметы обжигают горящим спиртом и неоднократно погружают в почву. На мешок или банку наклеивают этикетку с указанием места взятия образца, горизонта, даты. До анализа и между определениями пробы хранят в холодильнике.

66

При определении численности бактерий в почве сначала готовят методом разведения суспензии, содержащие разные концентрации почвы в 1 мл (Ю-2, 10 3, 10-4, 10-», 1(H).

Для этого на стерильное часовое стекло стерильным фарфоровым шпателем или алюминиевой чайной ложкой берут из байки навеску почвы 1 г. Предварительно почву в банке тщательно перемешивают. Ложку и часовое стекло обжигают в пламени горелки. Чтобы при взвешивании почвы в нее не попали из воздуха бактерии, часовое стекло накрывают другим часовым стеклом.

Навеску почвы, соблюдая условия асептики, переносят в колбу на 250 мл с 99 мл стерильной водопроводной воды. Смесь взбалтывают в течение 5 мин, не смачивая пробку. Стерильной пипеткой берут 1 мл суспензии, содержащей 10~2 г почвы, и переносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды. Пипетку неоднократно промывают водой из пробирки, чтобы максимально смыть клетки со стенок пипетки, и отставляют. Другой стерильной пипеткой берут из колбы еще 1 мл суспензии и помещают во вторую колбу, тоже содержащую 99 мл стерильной водопроводной воды, пипетку так же промывают и отставляют. Пробирку и вторую колбу взбалтывают 1 мин. В пробирке в 1 мл концентрация Ю-3 г, а во второй колбе—10-4 г. Точно так же переносят стерильными пипетками по 1 мл суспензии из второй колбы во вторую пробирку с 9 мл и в третью колбу с 99 мл стерильной водопроводной воды, готовят суспензии, содержащие соответственно в 1 мл 10-5 „ 10-е г почвы.

Для определения численности бактерий методом питательных пластин можно провести глубинный или поверхностный посев. Поверхностный посев более сложен и занимает больше времени. Поэтому для усвоения принципа подсчета численности бактерий методом питательных пластин на первых порах ограничимся проведением глубинного посева. Поверхностный посев будет использован при проведении общего микробиологического анализа почвы (глава X).

Чтобы определить, сколько клеток содержится в 1 мл суспензии каждого разведения, отдельными стерильными пипетками берут 1 мл суспензии из соответствующего разведения и переносят в стерильные ЧАШКИ

б* «7

Петри. На крышке чашки восковым карандашом отмечают разведения. Затем в каждую чашку с суспензией вливают расплавленный столбик мясо-пептонного агара, заранее приготовленный и разлитый в пробирки (!/з объема их) из расчета одни столбик на чашку. Температура расплавленного агара должна быть примерно 45°С. Ее устанавливают следующим образом: пробирку с расплавленным агаром прикладывают к щеке, если щека выдерживает температуру, столбик агара можно вылить в чашку Петри. Осторожным круговым вращением чашки агар перемешивают с суспензией. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном (чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с крышки), и помещают в термостат при 28 30"С.

Клетки микроорганизмов, попав в питательную среду, начинают размножаться и образуют колонии, видимые невооруженным глазом. Через 48 ч инкубации чашки вынимают кз термостата и в них подсчитывают число колоний. Окончательно подсчитывают колонии на 5-е сутки.

Чтобы подсчитать число бактерий в 1 г сырой почвы, число колоний на чашке умножают на степень разведения (число, показывающее, во сколько раз в каждом конкретном случае разбавили 1 г почвы). При ум

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(21.04.2019)