медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ножении числа колоний на степень разведения во всех случаях, казалось бы, должно получиться примерно одинаковое число зародышей в 1 г почвы. Однако практически это пс совсем так.

Иногда может оказаться так много клеток, что при развитии микроорганизмов колонии сольются; это часто наблюдается в чашках при разведении 10 г. Редко в чашках с суспензией из высоких разведений вырастают единичные колонии (меньше десяти), которые могут образоваться от случайно почавших клеток из воздуха. Поэтому при подсчете цифры могут сильно отклоняться, и результат будет недостоверным. Для правильного учета подсчитывают только такие чашки, в которых колоний свыше десяти и не более 200 (в последнем случае при условии, если колонии мелкие).

Чашки просматривают в проходящем свете, и, чтобы дважды не подсчитывать одни и те же колонии, их отмечают чернилами или тушью. Чтобы не упустить мелкоточечные колонии, чашки дополнительно проемат«

р ива ют с лупой. Можно использовать специальный прибор для подсчета колоний.'

В лабораторной практике встречаются случаи, когда в последнем разведении (Ю-6) число колоний значительно, больше 200. В этих случаях посев желательно повторить, увеличив число' разведений. Если, однако, новый посев осуществить невозможно, чашки подсчитывают, но исследователь может получить представление лишь о минимальном количестве микроорганизмов в почве. Для подсчета большого числа колоний (более 200) используют счетную камеру Вольфюгеля (рис. 8). Перевернутые вверх дном чашки Петри помещают на подставку камеры и накрывают стеклянной пластинкой, на которой нанесены квадратные сантиметры или более мелкие единицы. Число колоний подсчитывают в раз? гнх. местах чашки в. 20—25 квадратах, выводят среднее арифметическое на 1 см2 и делают пересчет на общую площадь чашки, равную площади круга (яЯ2).

Метод питательных пластин легковыполним, но имеет ряд недостатков. Существенным из них является отсутствие универсальной среды, на которой развивались

бы- все бактериальные зародыши, обитающие в почве.

Питание у бактерий специфично, и на каждой "среде

выявляется довольно узкая группа микроорганизмов.

Так, на МПА развиваются в основном бактерии, способные усваивать органические формы азота. Нитрифицирующие, целлюлозоразрушающие, азотфиксирующие

и.другие микробы на этой среде не выявляются. Для

более'полного представлений о населенности почвы делают посевы также и на специальные избирательные

среды или используют метод прямого подсчета микроорганизмов под микроскопом. - - - • ? "

64

При методе питательны! пластин возможен и неполный учет клеток в образце в связи с тем, что в одном месте на агаре может застыть не одна, а несколько клеток. Изолированные на агаре в одном месте клетки размножаются, их колонии сливаются, создавая впечатление только одной.

Частично можно внести поправку в счет колоний. Для этого из колоши с неоднородным характером роста готовят окрашенный препарат. Если под микроскопом обнаружатся разные формы (кокки, палочки, сарцины), то вносят поправку и колонию считают не за одну, а за три. Если же все клетки одииаковые, то считают, что колония произошла от одной клетки, хотя в этом месте одинаковых клеток могло быть 5, 10 и больше.

Для сравнения численности бактерий в разных почвах необходимо подсчитать их количество на 1 г абсолютно сухой почвы. С этой целью одновременно со взятием навески почвы для приготовления разведений в отдельный металлический или стеклянный бюкс берут навеску почвы (5—10 г) для определения влажности ее. Сушат почву при 105°С до постоянной массы. Затем число клеток в 1 г сырой почвы надо разделить и а навеску абсолютно сухой почвы, содержащейся в 1 г сырой почвы.

Пример, В I г сырой почвы содержится 5600 клеток. При влажности почвы 30% это число клеток будет соответствовать 0,7 г абсолютно сухой почвы. Для определений численности клеток в 1 г абсолютно сухой почвы составляют пропорцию:

5600

0,7 г —5600 je= —8000.

0,7

• 1 г—х

Таким образом, нами подсчитано, что в 1 Г абсолютно сухой почвы содержится 8 тыс. клеток.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА БАКТЕРИЙ

Колонии на чашке сначала группируют по культу-дльным признакам. К ним относятся: 1) цвет колонии белый, серый, розовый, желтый, зеленый и т. д.); 2) форма колоний (округлая, амебовидная, ризоидная, плоская) (рис. 9,а); 3) размеры колонии (10 мм и более в диаметре — крупная, от 1 до 10 мм—средняя,

70

71

1 мм — точечная); 4) поверхность (гладкая, шероховатая, складчатая, сухая, морщинистая, блестящая, в виде tмучнистой присыпки); 5) профиль (конусовидный, плоский, выпуклый, кратерообразный) (рис. 9,6); в) край колонии (ровный, волнистый, лопастный, зазубренный, бахромчатый); 7) консистенция (тестообразная, пастообразная, водянистая, тянущаяся, плотная, мажущаяся, маслянистая, пленчатая). Консистенцию колонии устанавливают прикосновением к ее поверхности микробиологической петлей или иглой.

Из каждой группы готовят препарат и определяют, к-какому роду они относятся, В отдельных сл

страница 25
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(23.08.2019)