медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

Чашки выдерживают от 2 до 7 СУТОК, так как СКОрость роста различных микроорганизмов неодинакова. Выросшие ИЗОЛИРОВАННЫЕ КОЛОНИИ ОТСЕВАЮТ петлей в ПРОБИРКИ НА ПОВЕРХНОСТЬ СКОШЕННОЙ ПЛОТНОЙ СРЕДЫ ИЛИ В жидкую СРЕДУ.

'Высев из НАКОПИТЕЛЬНОЙ культуры МИКРООРГАНИЗМОВ, относящихся К факультативным аэробам ИЛИ факультативным анаэробам, ДЛЯ получения изолированных колоний проводят методом глубинного посева.

Выделение чистой культуры анаэробных микроорганизмов по методу КОХА требует СОЗДАНИЯ УСЛОВИЙ, ограничивающих доступ кислорода ж культуре.

Выделение чистой культуры из одной клетки. Для ПОЛУЧЕНИЯ ЧИСТОЙ культуры из ОДНОЙ КЛЕТКИ МОЖНО ИСПОЛЬЗОВАТЬ КАПЕЛЬНЫЙ МЕТОД ЛИНДНЕРА, МИКРОМАНИПУЛЯТОР или микроселектор Перфильева.

78

Капельный метод используют при работе с крупными МИКРООРГАНИЗМАМИ (дрожжи, ПЛЕСНЕВЫЕ грибы, ВОДОРОСЛИ) .

НАКОПИТЕЛЬНУЮ КУЛЬТУРУ РАЗВОДЯТ В СТЕРИЛЬНОЙ СРЕДЕ с РАСЧЕТОМ, ЧТОБЫ в ОДНОЙ КАПЛЕ были ЕДИничные клетки ЗАТЕМ на ПОВЕРХНОСТИ стерильного покровного стекла готовят висячую КАПЛЮ, нанося ЕЕ на' стекло стальным пером, и микроскопируют ее. При ЭТОМ отмечают висячую КАПЛЮ, В которой обнаружена ТОЛЬко одна клетка, И помещают ее в стерильную чашку Петри, на дне КОТОРОЙ находится УВЛАЖНЕННАЯ фильтровальная бумага. После 12—24-ЧАСОВОЙ инкубации В термостате ОТМЕЧЕННЫЙ препарат МИКРОСКОПИРУЮТ. ЕсЛИ В КАПЛЕ ПРОИЗОШЛО РАЗМНОЖЕНИЕ КЛЕТКИ, ЕЕ ОСТОРОЖНО снимают С ПОКРОВНОГО стекла КУСОЧКОМ СТЕРИЛЬНОЙ ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ БУМАГИ и переносят В ПРОБИРКУ со стерильной жидкой средой.

Микроманипулятор (прибор, изобретенный Петерфи И Чамберс) снабжен точными механизмами, ПОЗВОЛЯЮщими выполнять очень тонкие ОПЕРАЦИИ, В частности ЗАХВАТИТЬ одну КЛЕТКУ бактерий СПЕЦИАЛЬНОЙ микроскопической ПИПЕТКОЙ. Все операции НА МИКРОМАНИПУЛЯТОРЕ ДЕЛАЮТ ПОД МИКРОСКОПОМ, КОТОРЫЙ УСТАНАВЛИВАЮТ МЕЖДУ ДВУМЯ ОПЕРАЦИОННЫМИ штативами. Штативы снабжены МИКРОСКОПИЧЕСКИМИ ВИНТАМИ, С помощью КОторых ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ движение ДЕРЖАТЕЛЕЙ с микроинструментами (•микропипетка, МИКРОИГЛА, микрошпатель, микроскальпели и т. д.).

Для того чтобы изолировать одну клетку, небольшую каплю ВЗВЕСИ исследуемой КУЛЬТУРЫ наносят на стерильное ПОКРОВНОЕ стекло. Край КАПЛИ устанавливаЮТ в середину ПОЛЯ зрения МИКРОСКОПА и рядом с НЕЙ НАНОСЯТ ИЗ ПИПЕТКИ КАПЛЮ ПИТАТЕЛЬНОГО РАСТВОРА. МиКРОПЕТЛЕЙ НАБИРАЮТ питательный РАСТВОР И подводят ЕЕ к капле с микроорганизмами, ЗАХВАТЫВАЮТ у края ОДНУ клетку, ПЕРЕНОСЯТ в питательный раствор и выращивают чистую культуру.

Б. В. Перфильев сконструировал специальный прибор — микроселектор; наиболее существенной его частью является стеклянный микрокапилляр, имеющий прямоугольное СЕЧЕНИЕ. Канал микрокапилляра хорошо ПРОСМАТРИВАЕТСЯ ПОД микроскопом ДАЖЕ с иммерсионНЫМ ОБЪЕКТИВОМ. СТЕРИЛЬНЫЙ КАПИЛЛЯР заполняют ИССЛЕДУЕМОЙ СУСПЕНЗИЕЙ клеток и ПРИ БОЛЬШОМ УВЕЛИ7?

чеиии микроскопа находят участок с одной клеткой. Специальным приспособлением этот участок капилляра под микроскопом (под контролем глаза) стерильно выбивают в приемник с питательным субстратом, Мнкро-селектор Перфильева может быть использован для выделения как крупных, так и мелких микроорганизмов.

Кроме указанных, разработаны и другие методы. Многие из них описаны в практическом руководстве под редакцией Н. А. Красильникова (Изд-во МГУ, 1966).

Чистота культуры проверяется одновременно несколькими способами: визуальным, микроскопировани-ем и высевом на питательных средах.

При визуальном контроле просматривается характер роста культуры на скошенном агаре. Если характер 'роста на поверхности скошенного агара однороден, то культура считаете! чистой. Если штрих неоднороден, культура считается загрязненной.

При микроскопическом контроле выбирают колонию с однородным характером роста и изолированную от других колоний и готовят фиксированный и окрашенный препарат, который просматривается под микроскопом с иммерсионной системой. Если в препарате все клетки морфологически однородны, культура считается чистой.

Чистоту культуры проверяют также посевом на ряд питательных сред, в том числе на мясо-пелтакиый агар. Однородность характера роста колонии свидетельствует о чистоте выделенной культуры микроорганизмов.' Набор сред определяется особенностями выделяемых микроорганизмов и их возможных. спутников.

Материмы и ОБОРУДОВАНИЕ. При постановке опыта: свежие почвенные пробы в стерильных банках, проба навоза и навозной жижн, проба воды, часовые стекла, ложки алюминиевые чайные или шпатели, пинцеты, весы и разновесы, стеклянные или металлические бюнсы, колбы емкостью 250 ил с 99 мл стерильной водопроводной волы, пробирки с 9 .мл стерильной водопроводной воды, прибор для взбалтывания почвенных суспензий, стерильные пипетки Мора не 1 мл, пробирки со столбиком мясопеп-тонносо arapi объема), стериальные чашки Петри, восковые карандаши, водяная баня, бумажные этикетки.

При анализе опыта: чашки с посевом, лупы, счетная камера Польфюгеля, микроскопы, иглы, пробирки о скошенным мясо-пеп-тоииым агаром, восковые карандаши и все необходимое для мнкро-скопирования.

Глава VII

страница 28
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(21.04.2019)