медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

т колбу до кипения, не закрывая пробкой. Сияв колбу с огня, ее охлаждают под струей водопроводной воды, закрывают сверху каучуковой пробкой, а на боковой тубус надевают каучуковую трубку с винтовым зажимом.

Присоединив колбу через каучуковую трубку к насосу (водоструйному или масляному насосу Камовского; удобнее пользоваться последним), открывают винтовой зажим и вымачивают из колбы воздух (до появления пузырьков "в среде). Затем, каучуковую трубку зажимают винтовым зажимом и колбу ставят в термостат при температуре 30—35°С.

Для изучения маслянокислого брожения крахмала опыт ставят на среде с картофелем. Сырой неочищенный картофель нарезают мелкими кубиками, заполняют ими

93

'/з высокой пробирки, добавляют немного мела (для нейтрализации масляной кислоты), заливают водопроводной водой на 1г и помещают в водяную баню при температуре 80°С и а 10 мин (для пастеризации). В среду не вносят ни почвы, ни маслянокислых бактерий, так как на кожуре картофеля споры их всегда имеются.

Элективные условия создаются следующими факторами: 1) крахмалом (источник углерода), используемым только микроорганизмами, содержащими фермент амилазу; 2) пастеризацией; 3) анаэробиозом — высокий столбик жидкости в пробирке и выделение в процессе брожения С02 и На, вытесняющих воздух.

Через 2—3 дня картофель всплывает наверх вследствие бурно идущего газообразования.

По окончании брожения культуральную жидкость используют для микросколирования маслянокислых бактерий и качественного определения продуктов брожения.

Микроскопирование маслянокислых бактерий. Питательную среду из колбы Вюрца или пробирки с картофелем берут пипеткой, закрыв указательным пальцем верхний конец, погрузив ее в средний слой сброженной жидкости. Слегка приподняв палец, набирают в пипетку жидкость, снова зажимают пальцем верхний конец пипетки и, вынув ее из колбы, наносят каплю на предметное стекло. К накопительной культуре добавляют каплю раствора Люгсля (I+KI) и покрывают покровным стеклом, на которое помещают' каплю кедрового масла. При микроскопировании препарата обнаруживаются клетки Clostridium butyricum, Clostridium buty-licum, Clostridium pasteurlanum (рис. 17) и других бактерий, имеющих подобную форму.

В клетках можно заметить овальные тельца, сильнее преломляющие свет. Это споры. В тех местах клетки, где содержится гранулеза, возникает синее окрашивание. Зарисовывают только окрашенные клетки, явно относящиеся к группе маслянокислых бактерий. Особенно хороший материал для микроскопических наблюдений получается при постановке опыта на картофеле.

Качественные реакции на масляную кислоту. Получение маслянокислого железа (реакция с FeCls). Нейтральные растворы маслянокислых солей при нагревании с FeClj приобретают коричневое окрашивание вслед7*

99

применение при технической обработке волокнистых растений.

Пектин разрушается микроорганизмами, содержащими фермент пектиназу. Химизм брожения пектиновых веществ состоит из двух последовательно идущих стадий. В первой стадии осуществляется гидролиз пектиновых веществ до САХАРОВ, во второй происходит дальнейшее сбраживание отдельных продуктов гидролиза (галактозы и арабинозы) до масляной кислоты, С02 и lit или Н20.

Возбудители маслянокислого брожения пектиновых веществ — облигатные анаэробы. Они подвижны, образуют споры; сбраживают пектин, глюкозу, арабинозу,

крахмал, но не сбраживают клетчатку. По отношению к источникам азота малотребовательны. Наряду с пектином хорошо усваивают и минеральные формы азота.

Для знакомства с брожением пектиновых веществ можно поставить следующий опыт. Снопик льняной соломы высотой 6—7 "см перевязывают в двух местах ниткой и вносят в пробирки, лучше большего размера, чем стандартные. Пробирки наполняют на % водопроводной водой, зажимают пинцетом и кипятят на горелке 2—. 3 мня для-удаления экстрактивных (легко сбраживаемых) веществ, которые могут служить источником углерода для других маслянокислых бактерий. Вода приобретает желто-зеленый цвет. Ее сливают. Наполнив пробирку вновь водопроводной водой, вторично кипятят несколько минут и снова сливают жидкость.- Так поступают 5—6 раз. После последнего кипячения жидкость не сливают. Охлаждают пробирку под краном и в снопик вводят свежий стебель, не подвергавшийся нагреванию.

Пробирку со "СНОПИКОМ ставят в термостат при 30— 35°С. Через 2—3 дня в ней начинается брожение,' а через 5—8 дней око заканчивается.

Накопление в культуральной жидкости масляной кислоты (наряду с уксусной кислотой, возникающей при гидролизе пектина) можно обнаружить с помощью качественных реакций.

Микроскопироваиие возбудителей брожения пектиновых веществ. Извлекают снопик из пробирки, -берут из середины его несколько соломинок н выжимают, из них немного жидкости на предметное стекло. Добавляют

101

б) -|«С12Н2а01Н-4"Н»О"^"СбН,2°в "

II. Сбраживание моносахаридов (глюкозы); СвН,20б—>-СН3СН2СН2СООН + СНаСООН +, +СНзСН2ОН + С02-ЬН2

Опыт по брожению целлюлозы ставят таким образом: в круглую плоскодонную колбу вносят около 1 — 2 г

страница 35
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(25.04.2019)