медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

фильтровальной бумаги (или вату), нарезанной мелкими полосками, в заливают доверху средой следующего состава (в %):

KNH.HPO, . ... 0,2 пептон 0,1

КН,РО, 0.1 MgSO, 0,05

CaCij . 0,03 СаСО, 0,5

Среду заражают небольшим количеством почвы и закрывают колбу корковой пробкой с отверстием для выхода газов.

Элективные условия в данном случае определяются следующими факторами: 1) клетчаткой (источник углерода), которая может потребляться только специфичными целлюлозоразлагающими бактериями, имеющими фермент целлюлазу; 2) анаэробиозом.

Пептон, введенный в среду в небольшом количестве, практически не нарушает элективности среды, но сильно стимулирует процесс.

Через несколько дней при температуре 30—35°С начинается брожение клетчатки, которое длится 2—3 недели. Фильтровальная бумага по мере сбраживания слегка ослизняется, желтеет и постепенно разрушается бактериями.

Для получения накопительной культуры термофильных целлюлозоразлагающих бактерий можно пользоваться питательной средой следующего состава (в г на 1 л водопроводной воды):

NaNH4HPO, . ... 1,0 MnSO следы

КН,РО, 0,5 FeSO, »

KiHPO< 0,5 пептон 0,5

MgSO. ...... 0.4 СаСОэ ..... 0,5

На дно длинных пробирок помещают полоски фильтровальной бумаги слоем 1,5—2 см, заливают средой на 7а и заражают небольшим количеством конского наво103

юг

за. Пробирки инкубируют при температуре 60°С. Через несколько дней начинают интенсивно выделяться газы. Бумага приобретает желтую окраску и постепенно превращается в аморфную массу.

Микроскопироваиие целлюлозоразлагающих бактерий. Извлекают пинцетом со дна колбы кусочек разлагающейся бумаги и размазывают на предметном стекле (без добавления воды). Мазок сушат обычным способом, фиксируют на пламени горелки и окрашивают фуксином.

В колбах, инкубируемых при температуре ЗчгС, развиваются длинные тонкие палочки с круглой спорой «а конце — Clostridium omelianskii (рис. 19).

В накопительной культуре термофильных целлюло: зоразлагающих бактерий чаще всего выявляются длинные крупные палочки с грушевидной спорой на юнце — Clostridium dissolvens.

Материалы и оборудование. Соля: KNHJIPO,, KHsPO.. CaCfc MgS04, CaCOj; фильтровальная бумага; пептон; колбы круглые плоскодонные на 100—150 мл; корковые пробки с отверстиями; почва; пинцета, микроскопы и все необходимое для микроскопирова-вяя.

& ОКИСЛЕНИЕ КЛЕТЧАТКИ

В окислении клетчатки в аэробных условиях участвуют аэробные бактерии, актиномицеты и грибы.

Эти микроорганизмы выделяют ферменты — целлю-лазу и целлобиазу, разлагающие клетчатку до глюко104 зы, которую они окисляют до С02 и Н20; промежуточным продуктом являются оксикислоты.

За окислением клетчатки можно наблюдать, пользуясь методом Виноградского на гелевых пластинах.

Промытые и прокипяченные голевые пластины пропитывают 2—3 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мл дистиллированной воды) i

KNOs , .2.5 NaCl 0.5

KillPO, ...... 1,0 FeSO, ...... 0,01

MgSO, 0,5 Mn5(SO,)a 0.01

Поверхность геля покрывают стерильным кружком фильтровальной бумаги, по которому раскладывают (по трафарету) 50 комочков почвы (диаметром 1—2 мм) или наносят суспензию соответствующего разбавления. Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат при температуре 28—30°С,

На 8—10-е сутки вокруг комочков появляются колонии в виде розовых, зеленых, желтых, буровато-желтых пятен. Микроскопироваиие препаратов, приготовленных из таких колоний, позволяет обнаружить разные виды целлюлозоразрушающих бактерий (рис. 20): a) Cyto-phaga — бактерии со сложным циклом развития, относящиеся к миксобактериям. В молодом возрасте клетки с заостренными концами (рис. 20,а), при старении они переходят, в укороченные палочки с округлыми концами. На клетчатке колонии в виде желтых, розовых, коричневых пятен; б) миксобактерии родов Polyangium (рис. 20, г) и Sorangium (рис. 20, д) — молодые клетки палочковидные, при старении они укорачиваются и образуют микроцисты, которые собраны по 12—40 клеток в цисты. Из .них формируются плодовые тела. На клетчатке образуют колонии в виде слизистого налета желтого, оранжевого или темно-коричневого цвета; в) вибрионы рода Cellvibrio (рис. 20, б) — слегка изогнутые палочки с закругленными концами. Формируют колонии в виде охристых или зеленых пятен; г) Cellfalcicula — палочковидные клетки, утолщенные в центре, с заостренными концами (рис. 20, е). Образуют на клетчатке слизистые зеленые колонии.

Активно разлагают клетчатку отдельные представители несовершенных грибов родов Trichoderma, Fusarium, Alternaria, Stachybotrys, Cladosporium, Dematium а др. (см. стр. 159), а также актиномицеты.

Плотность обрастания комочков почвы целлюлоза-разрушающими микроорганизмами можно выразить в процентах. Число комочков почвы, разложенных на чашке, принимают за 100%. Затем высчитывают процент комочков почвы, давших вокруг себя колонии цсллюлозоразрушающи

страница 36
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(26.04.2019)