медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

оборудование. При постановке опыта: основная жидкая питательная среда для накопительной культуры без источника углерода, склянка с керосином или вазелиновым маслом, почвенный образец, колбы на 250 и 100 ил, цилиндр на 100 мл, алюминиевая чайная ложка, вата для пробок, пипетки моровскве на 1 мл. "

При снятии опыт: микроскопы и все необходимое для микро-скопироваиня, колбы с накопительными культурами.

Для проверки способности чистых культур окислять парафин можно использовать метод Маккланга (1955). Для этого готовят стерильную агаризованную ' среду следующего состава (в г на 1 л дистиллированной воды); NaNOs—2,0; MnSO«—0,008; KsHPO.—1,0; ZnS04— 0,002; MgSO«-7H20—0,5; агар—20; Fes(S04)s—0,01.

Стерильный расплавленный агар разливают в стерильные чашки Петри, в которые одновременно вносят стерильной пипеткой 3—4 капли расплавленного стерильного парафина, и перемешивают его со средой. После охлаждения на поверхности застывшего агара

W9

образуются островки парафина в виде тонких пленок. По поверхности агара сплошным газоном высевают суспензию чистой культуры углеводородокисляющих бактерий, для'чего на поверхность агара наносят каплю (0,05 мл) суспензии чистой культуры и шпателем растирают ее по поверхности агара. Чашку помещают во влажную камеру и ставят в термостат при -28°С.

После 2—3 недель инкубации микроорганизмы, способные окислять парафин, разрастаются вокруг пленок парафина и покрывают пленку сплошным толстым слоем.

Глава IX ПРЕВРАЩЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМАМИ ОРГАНИЧЕСКИХ И МИНЕРАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИИ АЗОТА

1. АММОНИФИКАЦИЯ

Аммонификация -- это превращение органических

форм азота в аммиачный азот. Вызывается она различными микроорганизмами (бактериями, актиномицетами и грибами).

Аммонификация

Микроорганизмы, вызывающие аммонификацию белковых веществ, выделяют в окружающую среду протсо-литические ферменты, под действием которых эти вещества гидролизуются до аминокислот. Последние поступают в клетку и в ней дезаминнруются с образованием аммиака, органических кислот и других продуктов. В белке отношение С : N=3,5:1.

При разложении белка выделяются также H2S, меркаптаны, скатол и индол, имеющие неприятный запах.

Для изучения аммонификации белковых веществ в качестве питательной среды можно использовать мясной бульон с добавлением 3% пептона.

По 30 мл среды разливают в эрленмейеровскне колбы емкостью 100 мл и добавляют по одной трети чайной ложки почвы. Колбы закрывают ватными пробками. Над средой подвешивают две бумажки — красную

по

лакмусовую, смоченную дистиллированной водой (для обнаружения выделяющегося аммиака),и фильтровальную, смоченную уксуснокислым свинцом (для выявления сероводорода и меркаптана), закрепляя их между пробкой и стенками горлышка колбы. Бумажки не должны касаться среды. Сверху колбы прикрывают пергаментной бумагой.

На 3—5-е сутки инкубации при температуре 28—30°С опыт заканчивают и содержимое в колбе анализируют. Определяют продукты жизнедеятельности микроорганизмов при разложении белка и возбудителей процесса.

Исследование возбудителей гнилостного распада белковых веществ. Для обиаружеиия возбудителей готовят препарат живых бактерий (в раздавленной капле), а также фиксированный и окрашенный (рис. 22). Чаще других в препарате встречаются подвижные клетки Proteus vulgaris (рис. 22,6), преобладающие на первых стадиях распада белков. Это неспорообразующие, неодинаковой длины палочки. Кроме того, на препарате много спорообразующих клеток Вас. mycoides

(рис, 22, а) и Вас. putrificus (рис. 22, в). У последних споры расположены терминально, и диаметр их шире клетки.

Вас. mycoides вызывает аммонификацию белковых веществ в'аэробных условиях. Proteus vulgaris — факультативный анаэроб, a Clostridium putrificus вызывает аммонификацию в анаэробных условиях. Последняя форма может развиваться как аэроб, если в среде находятся аэробные микроорганизмы, поглощающие кислород.

Для определения продуктов гнилостного распада белка делают следующие анализы.

• Проба на аммиак. Выделяющийся в атмосферу NH5" улавливается подвешенной красной лакмусовой бумажкой, которая при этом синеет.

Накопление аммиака в субстрате устанавливают при помощи реактива Несслера . Реакция капельная. На фарфоровые пластинки с лунками или в чашки помещают каплю реактива Несслера, затем каплю субстрата. При большом количестве аммиака образуется коричневый или буроватый осадок, при небольшом—> появляется оранжевая или желтая окраска.

Проба на сероводород. Его обнаруживают с помощью подвешенной фильтровальной бумажки, смочеиной уксуснокислым свинцом [РЬ(СН3СОО)2], бумажка чернеет. Если, она покрывается серебристым налетом, это свидетельствует о том, что наряду с сероводородом выделяются еще и меркаптаны (например, метилмеркап-тан CHjSH).

растворяют в 50 мл воды и к раствору добавляют до насыщения (около 32 г) небольшими порциями Hgl,. После этого приливают 460 мл воды и вносят 134 г КОН. Отстоявшуюся жидкость сливают в темную склянку.

Проба на индол. Для выявления индола поль

страница 38
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(18.02.2019)