медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

зуются или реакцией Сальковского, или реакцией с парадиме-тиламидобензальдегидом . В первом случае к 10 мл субстрата добавляют 1 мл 0,2%-юго KN02 и несколько капель крепкой серной кислоты. При взаимодействии этих веществ с индолом получается красно-фиолетовое окрашивание. Эту реакцию дает также индолилуксусная кислота. Вторая реакция на индол более специфична. К 10 мл субстрата (однодневной культуры) добавляют

5 мл парадиметиламидобензальдегида и 5 мл насыщенного раствора сернокислого калия. При наличии индола возникает интенсивно-красное окрашивание.

Материалы и оборудование. Питательная среда — МБ+3% пептона, цилиндры емкостью 100 мл, колбы Эрленмейера иа 100— 150 мл, почва, полоски красной лакмусовой и фильтровальной бумаги, раствор уксуснокислого свинца, вата для пробок, белые фарфоровые пластинки с лунками (или фарфоровые чашки) реактив Несслера, микроскоп и все необходимое для приготовления окрашенных препаратов, пипетки, покровные стекла.

Мочевина — конечный продукт .превращения соединений азота в организме человека и животных.

Бактерии, вызывающие аммонификацию мочевины, вырабатывают экзофермент уреазу, который гидролизу-ет мочевину до аммиака.

СО (NHS) а+2Н20 -н- 2МН3+С02+Н20.

В качестве источника углерода они используют некоторые углеводы и соли органических кислот.

Для наблюдения за процессом аммонификации мочевины можно использовать питательную среду следующего состава (в г на 1 л дистиллированной воды):

К или Na виииокиелый (можно и соль

яблочной кислоты) 5,0

мочевина 50,0

К,Н!Ю4 • 0,5

MgSOi 0,2

Среду разливают по 30 мл в эрленмейеровские колбы емкостью 100 мл, заражают почвой (или навозом) и ставят в термостат при 25—30°С. Для обнаружения аммиака, выделяющегося в атмосферу, под ватную пробку подвешивают красную лакмусовую бумажку, смоченную дистиллированной водой.

На 3—5-е сутки опыт заканчивают и культуру подвергают анализу.

Устанавливают выделение аммиака по посинению красной лакмусовой бумажки, а накопление его в субстрате— капельной реакцией с реактивом Несслера.

К капле этого реактива (на фарфоровой пластинке) добавляют каплю субстрата. Образуется буроватый осадок.

Для изучения возбудителей аммонификации мочевины из едва заметкой пленки на субстрате готовят препарат и окрашивают его фуксином. Чаще всего под мик8 Тепяер Е. 3. . 113

роскопом встречаются клетки Вас, pasteurii (рис. 23), реже Planosarclna ureae

и др.

Материалы и оборудование.

Среда для аммонификации мочевины, цилиндры на 100 ил, колбы Эрленмейера емкостью 100 мл, почва, алюминиевые ложкн, подоски красной лакмусовой бумажки, вата, белые фарфоровые пластинки с лункамн, реактив Несслера, пипетки, микроскопы в все необходимое для приготовления препаратов и просмотра их под микро2. НИТРИФИКАЦИЯ

Под нитрификацией понимают процессы окисления

аммиака до нитрита и нитрата. Превращение аммиака в нитрит и нитрат идет в две фазы и вызывается главным образом бактериями двух родов (нитрифицирующие бактерии):

NUrosomonas: NH4++1 '/гО^Ог+гН + НгО; Nitrobaclcr: N02-+,/202->N03Энергию, возникающую при окислении аммиака и нитрита, бактерии используют для ассимиляции углекислого газа. Микроорганизмы, осуществляющие этот процесс, относятся к хсмолитоавтотрофам и являются облигатными аэробами.

Для выявления бактерий первой фазы нитрификации и определения относительной плотности населения их в почве, используют метод Виноградского на г елевых пластинах.

Промытые, прокипяченные чашки Петри с кремнекислым гелем пропитывают 3—5 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мл дистиллированной воды): (NH.hSCV — 2,0; КиНРО,— 1,0; MgS04 — 0,5; NaCl—0,4; FeS04—0,4; MgCOj или CaC03—5,0.

При этом MgCOa, СаСОз перед приготовлением среды растирают пестиком в стерильной ступке.

» По данным доктора Роммсля, лучшие результаты получаются,

если (NH.hSO, заменить фосфорвоаииоиииномагниевой солью

(NH«MgP04). ?

Питательную среду в чашках упаривают (при 40— 50°С) до образования белой блестящей эмалевой поверхности, возникающей за счет равномерного распределения слоя MgCO, или CaCOs.

Оба эти слоя служат индикаторами процесса нитрификации, так как в тех местах на геле, где развиваются эти бактерии, появляются зоны растворения карбонатов, в которых и обнаруживают нитрифицирующие бактерии.

По эмалевой поверхности пластины раскладывают определенное число комочков свежей почвы. Для этого берут два часовых стекла, стерилизуют их (фламбиро-ваяием), затем в одно часовое стекло помещают почву, а в другое наливают дистиллированную воду. Палочкой с оттянутым концом (предварительно ее слегка проводят над огнем и смачивают водой) захватывают комочек почвы (диаметр 1—2 мм) и по трафарету помещают на поверхность эмалевой пластины.

Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат при температуре 28—30°С. Через некоторое время в зависимости от активности нитрифицирующих бактерий (спустя 7, 14, 21 день) вокруг отдельных комочков почвы появляются зоны растворения мела, свидетельствующие об обраст

страница 39
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(25.08.2019)