медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ании комочков почвы нитрифицирующими бактериями. Чашки вынимают и подвергают анализу: определяют процент обрастания комочков почвы нитрифицирующими бактериями, изучают по морфологии их представителей и продукты жизнедеятельности.

Для изучения процента обрастания комочков почвы сначала подсчитывают общее число комочков почвы, разложенных на чашке, и принимают их за 100%. Затем подсчитывают число комочков почвы, давших зоны растворения мела, и высчитывают, какой процент они составляют от общего числа комочков почвы. Эта величина не показывает абсолютное количество этих бактерий в почве. Однако если сопоставить процент обрастания ими комочков разных почв, то этот показатель позволит судить о том, какая почва более богата нитрифицирующими бактериями.

8*

Чтобы познакомиться с продуктами жизнедеятельно сти бактерий первой фазы нитрификации, надо чистым ланцетом вырезать по три кусочка геля из зон растворе ния мела н с мест, в которых мел не растворился, помеJ15

114

Рис. 24 Нитрифицирующие бактерии: с — mtmswnonas: б — Ndrobmttr,

стить эти кусочки изолированно в дунки белой фарфоровой пластины или в фарфоровые чашки. Сначала делают пробы с кусочками геля с контрольных участков (где мел не растворился). Пробу делают на аммиак с реактивом- Несслера; гель приобретает желтовато-оранжевую окраску, что свидетельствует о присутствии аммиака. Затем пробу делают иа нитрит с реактивом Грис- ' са или цинк-нод-крахмалом, добавляя каплю 10%-ной серной Кислоты; гель остается без изменения, что указывает на отсутствие нитрита.

Аналогичные пробы делают с кусочками геля, взять.-ми из зон растворения мела (или MgC03). В этом случае реакция на аммиак с реактивом Несслера отрицательная (гель не. окрашивается). Реактив Грисса окрашивает его в красный цвет, а с цинк-йодкрах.чалом в кислой среде голь окрашивается в темно-синий цвет, что свидетельствует о появлении азотистой кислоты.

Для знакомства с возбудителями первой фазы нитрификации из зон растворения мела берут иглой немного материала и готовят окрашенный препарат. При его микроскопировании можно обнаружить овальные клетки, похожие на нуль, — Nitrosomnnas (рис. 24, о) и Nit-rosospira. Первые встречаются в старопахотных почвах, вторые —в целинных. В почвах Европы чаше встречаются Nltrosomonas europea.

Микроорганизмы, вызывающие вторую фазу нитрификации, можно наблюдать на чашках с культурой первой фазы при более длительном стоянии их. После исчезновения аммиака образовавшийся нитрит' может окисляться до нитрата. В этом легко убедиться по исчезновению нитрита и появлению нитрата. Для этого вырезают чистым ланцетом два кусочка геля, помещают их в фарфоровые лунки и об исчезновении нитрита судят по отрицательной реакции с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом в кислой среде. С другим кусочком геля делают пробу на нитрат с дифениламином в растворе крепкой серной, кислоты. В присутствии азотной кислоты гель -приобретает темно-синий цвет (реакцию на нитрат с дифениламином' делают только в отсутствие нитрита). В препарате, приготовленном из мест растворения мела, взятого с поверхности чашки, в этот период можно обнаружить возбудителей второй фазы нитрификации — мелкие, слегка искривленные и угловатые клетки Nitrobacter (рис. 24,6).

В связи с тем что коэффициент полезного действия хемосинтеза у нитрифицирующих бактерий очень низкий, рост клеточной массы их незначителен, и в препаратах, приготовленных обычным способом, они не всегда обнаруживаются или обнаруживаются с трудом.

Для выявления нитрифицирующих бактерий обеих фаз из культуры на гелевых пластинах разработан прием (Е. 3. Теппер), который дает весьма удовлетворительные результаты. В чашку, в которой прошли процессы нитрификации, осторожно вливают дистиллированную воду, бактерии при этом собираются на поверхности воды. Если к поверхности воды прикоснуться чистым _ обезжиренным предметным стеклом, то на нем остаются ' нитрифицирующие бактерии. После сушки и фиксации препарата его красят фуксином и рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой.

В препаратах из чашек, в которых прошли первая и вторая фазы нитрификации, можно легко обнаружить Представителей обоих родов нитрифицирующих бактерий и их спутников, в частности бактерии рода Bacto-derma, всегда сопровождающие вторую фазу нитрификации.

Для специального наблюдения за процессом второй фазы нитрификации опыт также можно ставить на гелевых пластинах. Их пропитывают 2—3 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мм дистиллированной воды): NaN02— 1,0; Ка2С03 (безводный) — 1,0; NaCI-0,5; КгНРО,-0,5; MgS04 — 0,5; FeS04 - 0,4.

117

Среду упаривают при 50°С до исчезновения свободной воды и по поверхности геля, как в предыдущем опыте, раскладывают комочки почвы. Затем после 20—30 дней инкубации при 28—30°С анализируют, как и в предыдущем опыте.

Жидки* кулыуры нитрифицирующих бактерий

Первую и вторую фазы нитрификации можно наблюдать и в жидких средах. Однако в них процессы менее наглядны.

Состав питательной среды для первой фазы (в %):

страница 40
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(23.04.2019)