медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

(NH4)2SO4-0,2; KsHPO.-O.l; MgSO. - 0,05; NaCl — 0,2; FcS04 - 0,04; CaC03 или MgCOs — 0,5.

Состав питательной среды для второй фазы (в %): NaNOj —0,1; NasCOa (безводный) — 0,1; NaCl — 0,05; К2НРО4—0,05; MgS04 — 0,05; FeS04 — 0,04.

Для получения накопительной культуры среды после хорошего встряхивания (взбалтывания) разливают по 30 мл в эрленмейеровские колбы емкостью 100 мл, заражают небольшим количеством почвы (четверть чайной ложки) и ставят в термостат при температуре 25—30°С. Спустя 7 дней (а иногда 14 или 21 день) в среде для первой фазы нитрификации появляется азотистая, а в среде для второй — азотная кислота. После исчезновения аммиака (для первой фазы) в азотистой кислоты (для второй фазы) опыт заканчивают.

При изучении первой фазы нитрификации устанавливают образование азотистой кислоты (реакция капельная с реактивом Грисса или цинк-йод-крахмалом в кислой среде). При исследовании второй фазы — после исчезновения нитрита проводят капельную реакцию на нитрат с дифениламином. Для изучения возбудителей первой и второй фазы нитрификации из соответствующих культур с поверхности среды петлей захватывают немного материала и готовят мазок.

Приготовление кремнекислого геля. Соляную кислоту плотностью 1,19 в высоком цилиндре разбавляют водой до плотности 1,10 (на Каждые 500 мл крепкой соляной кислоты можно добавить примерно 500 мл дистиллированной воды). Жидкое стекло наливают в высокий цилиндр и разводят водой до плотности 1,06—1,08; на 500 мл воды можно прилить 100 мл стекла (его можно заменить 35%-ным раствором кремнекислого натрия).

не

Цилиндры и ареометр после разбавления стекла тщательно отмывают.

Соляную кислоту плотностью 1,10 смешивают с жидким стеклом плотностью 1,06 (а для более плотного геля — 1,08) в равных объемах; стекло осторожно прибавляют (при постоянном помешивании) к соляной кислоте. Для устранения возможности появления в толще геля чечевнцеобразных полостей при стерилизации (по Н. М. Лазареву) раствор соляной кислоты и стекла нагревают до кипения и смешивают. Затем смесь перемешивают и разливают в чашки слоем не менее 0,7 см. Через 8— 12 1 образуется гель. Дав ему хорошо застыть и обсохнуть сверху, чашки с гелем помещают в эмалированную кастрюлю или в большой стеклянный сосуд ii ставят под кран для промывки. На водопроводный кран надевают толстую каучуковую трубку, конец которой опускают на дно кастрюли или сосуда. Струя воды должна быть слабая. Промывают кремневые пластины до исчезновения следов хлора (проба 1 % -ного AgNOa в присутствии НМ08), окунают в кипящую воду, а при необходимости стерилизуют в кипятильнике Коха при температуре 100"С 30 мин (3 раза через 24 ч).

Приготовление реактивов и ход реакций. 1. Реактии Грисса состоит из двух растворов; первый — 0,5 г суль-фаниловой кислоты в 150 мл разбавленной уксусной кислоты; второй — 0,1 г а-нафтиламина в 20 мл воды с добавлением 150 мл разбавленной уксусной кислоты. В пробирку наливают по 10 мл обоих растворов и 10 мл исследуемого раствора и кипятят. В присутствии азотистой кислоты появляется красное окрашивание (реактив очень чувствителен к HNO2).

2. Цинк-йод-крахмал. 4 г крахмала размешивают с

небольшим количеством воды, затем при постоянном помешивании прибавляют к кипящему раствору хлористый

цинк (20 г в 100 мл воды). Смесь кипятят до растворения крахмала, добавляют 2 г сухого йодистого цинка и

доливают водой до 1 л. Раствор хранят в темном месте.

Реакцию проводят следующим образом: в лунку фарфоровой пластинки вносят каплю цинк-йод-крахмала, каплю 10%-ной серной кислоты и каплю исследуемого субстрата. В присутствии азотистой кислоты появляется темно-синее окрашивание.

3. Дифениламин в растворе крепкой серной кислоты.

Каплю дифениламина вносят в лунку фарфоровой пла119

стинки и к ней добавляют каплю испытуемого раствора.

Если в растворе содержится азотная кислота, то образуется темно-синее окрашивание; то же получается и при наличии азотистой, кислоты. Поэтому пробу на нитраты с дифениламином используют при отсутствии нитрита.

Материалы и оборудовав не. Гелевыс пластины, пропитанные

соответствующей питательной средой, свежая почва, часовые стекла, палочки с оттянутым концом и трафарет, соответствующие жидкие среды, эрленыеяеровсхие колбочки, почва, алюминиевые ложки, реактив Несслера и шкк-йод-крахмал, 10%-пая H*SO« (или реактив Грисса), микроскопы и все необходимое для приготовления прела-ратов и мнкроскошровапия, фарфоровые пластинки с лунками, дифениламин, растворенный в крепкой серной кислоте.

J. ДЕНИТРИФИКАЦИЯ (НИТРАТИОе ДЫХАНИЕ)

Нитратное дыхание — это дыхание с использованием связанного кислорода (кислорода нитрата). Многие бактерии в актах дыхания восстанавливают нитрат с выделением молекулярного азота (N2 или закиси азота NaO). Этот процесс дисснмиляциоиного восстановления нитрата получил название денитрификации. При этом органические субстраты окисляются до С02 и Н20. Суммарно процесс можно выразить следующим уравнением:

С6Ни06+4 NO|=6C02+6H20+2N1 • Микроорганизмы, осуществ

страница 41
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(16.07.2019)