медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ляющие процесс денитрификации, широко распространены в природе. Большинство относятся к родам Pseudomonas и Micrococcus (Ps. deniirilicans; Ps. fluorescens; Ps. stutzeri; Micrococcus denitrif icons). Процесс протекает в основном в анаэробных условиях, когда нет доступа кислорода.

Для наблюдения за процессом денитрификации и получения накопительной культуры денитрифицирующих бактерий обычно пользуются средой Гильтая (стр. 144) или средой более простого состава (в г): сегнетова соль (натриевокалиевая соль винной кислоты) или лимоннокислый натрий 20 г, KNOs—2,0; К2НРО4—0,5; MgS04— 0,2; FeS04 — следы; дистиллированная вода—1000 мл.

Техника постановки опыта следующая: в склянку или колбу Эрленмейера наливают немного питательной среды и к ней добавляют одну треть чайной ложки почвы. Среду тщательно перемешивают с почвой для удаления пузырьков воздуха, затем наполняют склянку или колбу

питательной средой до края и закрывают каучуковой пробкой, в которую вставлена открытая* с двух сторон стеклянная трубка, расширенная в средней части. Пробка вытесняет .часть жидкости в стеклянную трубку (рис. 25). Под пробкой не должны оставаться пузырьки воздуха. В трубку над средой наливают вазелиновое масло небольшим слоем, и таким образом в сосуде с жидкой средой создаются анаэробные условия. Отсутствие углеводов в среде исключает, процесс брожения. В этих условиях будут развиваться лишь микроорганизмы, способные использовать кислород связанных соединений (в первую очередь нитрата).

При постановке опыта наличие в среде нитрата устанавливается реакцией (капельной) с дифениламином, растворенным в крепкой серной кислоте. В лунку фарфоровой пластинки вносят каплю реактива — дифениламина в крепкой серной кислоте. К ней добавляют каплю субстрата; при наличии нитрата капля окрашивается в темно-синий цвет. Прибор со средой и почвой помещают в термостат при температуре 28—30°С. После 5—6 дней инкубации культуру подвергают анализу: отмечают появление пузырьков газа под пробкой и цвет среды. Для знакомства с возбудителями денитрификации из середины субстрата чистой пипеткой берут каплю и готовят фиксированный и окрашенный препарат, затем' рассматривают его под микроскопом с иммерсионной системой В препарате преобладают неспоровые палочки Pseudomonas denitrificans. Нередко наблюдается позеленение среды (особенно при использовании углерода лимонной кислоты), что указывает на развитие Pseudomonas \luo121

130

фекшюнной нити могут проникать в цитоплазму растительных клеток. В зрелой клубеньковой ткани бактериальные клетки превращаются в бактероиды. В отличие от бактериальной клетки, имеющей форму палочки, бактероиды — грушевидные, сферические или ветвистые образования в 3—4 раза более .крупных размеров. Зона клубенька с клетками как бактериальной, так и бакте-роидной формы получила название бактероидной. В клубеньке развивается собственная сосудистая система, примыкающая к сосудистым пучкам центрального цилиндра корня; по сосудам происходит обмен веществ между клубеньковыми бактериями и растением. Растения снабжают клубеньковые бактерии углеводами и минеральными солями, а ризобии 70% ассимилируемого ими азота отдают бобовым растениям. Форма и размеры клубеньков разных бобовых растений неодинаковы (рис. 26). У клевера они продолговатые и мелкие, у гороха и вики — округлые и крупные, у фасоли и сои их диаметр достигает 1 см. У люпина клубеньки крупные (иногда достигают величины грецкого ореха). Разрушение клубеньков сопровождается деградацией элементов растительной клетки и лизисом части бактероидов, тогда как остальная часть образует мелкие кокковндиые клетки — своеобразные артроспоры, выполняющие функцию размножения. При изучении клубеньковых бактерий в оптическом микроскопе артроспоры не видны. Их можно обнаружить лишь при большом увеличении в электронном микроскопе.

Строение клубеньков бобовых изучают на срезах, которые делают острой ботанической бритвой или готовят на микротоме. Тонкий срез, продольный или поперечный, помещают на предметное стекло и просматривают в оаз123

бобовых, следует зарисовать и подписать их наименование.

Для получения культур клубеньковых бактерий из клубеньков кусочек корня с клубеньком тщательно промывают в стерильной воде, стерилизуют поверхность клубенька в растворе сулемы и спирте, затем вновь промывают в стерильной воде, раздавливают клубенек в капле стерильной воды и суспензию высевают на пластинках из бобового агара или среды Фреда (см. стр. 183).

Материалы и оборудование. Зафиксированные (в формалине)

корни равных бобовых растений с клубеньками, ботаническая бритва, препаровальные иглы и все необходимое для приготовления препаратов и мнкроскопарования.

Снободиомомущие а^отфмксирующме бактерии

Среди свободноживущих азотфиксирующих бактерий наибольший интерес .представляют бактерии родов Clostridium и Azotobacter.

CI. pasteurianum, изолированный впервые в чистую культуру С. Н. Вииоградским в 1893 г., — облигатный анаэроб. Энергию для всех процессов жизнедеятельности, в том числе и

страница 42
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.04.2019)