медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ассимиляции атмосферного азота, они -получают за счет маслянокислого брожения. Сбраживают они моно- и дисахара и некоторые полисахариды. В молодой .культуре клетки С/, pasteurianum имеют форму палочек с пернтрихалыю расположенными жгутиками, затем клетка образует спору, которая располагается поближе к краю, а чаще в середине клетки. Споры овальные, окружены капсулой. Клетки имеют клост-рндиальную форму (рис. 27). CI. pasteurianum накапливает в клетках запасное питательное вещество — гра-нулезу (полисахарид, близкий, к крахмалу), который окрашивается при воздействии раствора Люголя в фиолетовый цвет. В период образования спор гранулеза постепенно исчезает. Анаэробные азотфиксаторы широко распространены в природе. Они встречаются почти повсеместно в почвах и загрязненных водоемах (подробные сведения об анаэробных азотфиксаторах можно получить в монографии Е. Н. Мишустина и В. Т. Емцсва, 1974).

Для знакомства с анаэробным азотфиксатором CL pasteurianum и продуктами его жизнедеятельности до125

статочно получить накопительную культуру, используя для этой цели элективную среду Внноградского (в г иа 1 л дистиллированной воды): глюкоза — 20,0; КгНРСц— 1,0; MgS04—0,5; NaCl - 0,5; СаССЬ-20,0 .

Колбу Эрленмейера емкостью 100—150'мл заполняют на 5/з се объема жидкой средой, предварительно взболтав ее. Для инокуляции в среду вносят одну треть чайной ложки почвы. Элективность среды создается отсутствием в среде связанного' азота и анаэробными условиями. Мел добавляют для нейтрализации масляной кислоты. Опыт можно ставить также в высоких пробирках. Колбы с посевом помещают в термостат при 25— 30°С. Через несколько дней можно отметить помутнение среды и обильное образование газов.

На поверхности среды развиваются аэробные микроорганизмы, поглощающие кислород атмосферы. Посте 4—-5 дней инкубации культура подвергается анализу.

Для обнаружения CI. pasteurianum содержимое колбы хорошо размешивают и в течение 15—20 с дают осесть грубым частицам, после чего из середины субстрата пипеткой берут немного материала и наносят каплю на предметное стекло. К ней добавляют каплю раствора Люголя, затем накрывают покровным стеклом и микроскопируют с иммерсионной системой объектива. Клетки CI. pasteurianum, содержащие гранулезу, приобретают фиолетовый цвет. Как правило, преобладают веретенообразные формы.

Из продуктов жизнедеятельности, кроме газов (СОг, Hj), можно обнаружить масляную кислоту (реакция с FeClg). К 5 мл субстрата, внесенного в пробирку, добавляют 2 мл хлорного железа и нагревают до кипения. Образующийся раствор маслянокислого железа в проходящем свете имеет кроваво-красный или вишнево-красный цвет.

Чистую культуру CI. pasteurianum выделяют из колоний, полученных при посеве накопительной культуры (после обязательной пастеризации ее) на агаризован-иой среде Внноградского или «а картофельно-морковиом агаре В. Т. Ем цепа: картофельный отвар — 500 мл; морковный отвар — 500 мл; глюкоза—20 г; К2НРО4—1 г; MgS04-7H20 0,5 г; NaCl, MnS04-7H20, FeS04-7H20 следы; пептон — 5 г; дрожжевой автолизат — 0,02 мл; СаССч — 40 г; агар —б г. Отвары готовят следующим образом: 0,5 кг очищенного картофеля и 0,5 кг моркови заливают 2 л дистиллированной воды, кипятят 10 мин, фильтруют, затем добавляют дистиллированной воды до первоначального уровня.

г и оборудование. При постановке опыта: жидкая

среда С. Н. Внноградского, колбы Эрленмейера емкостью 100--150 мл или высокие пробирки, почвенные пробы, алюминиевые чайные ложки или шпатель.

Для анализа культуры: микроскопы и все необходимое для микроскопироваиия препаратов в раздавленной капле, раствор Люголя, пробирки обычные, 10%-иое норное железо.

Azotobacter фиксирует азот в аэробных условиях. Впервые выделен в 1001 г. Бсйоринком под названием Azotobacter chroococcum. Затем были выделены и другие виды азотобактера. Azotobacter chroococcum характеризуется темно-коричневым, почти черным цветом колоний. В жидких (культурах образует пленку, а иа агаре и на гелевых пластинках—слизистые колонии,

127

Молодые клетки азотобактера имеют вид попарно соединенных крупных, коротких палочек с закругленными концами. По мере развития клетки становятся эллипсоидными, а затем круглыми (рис. 28). Клетки азотобактера часто окружены; слизистой капсулой, которая выявляется после, окраски клеток фуксином' и смешивания с разбавленной тушью. Внутри' клеток наблюдается ясно выраженная зернистость. Azotobader vinelandti на плотных средах образует сар-циноподобные скопления.

Азотобактер более требователен к условиям окружающей среды, поэтому он менее распространен в noise, чем CI. pasteurlanum. В качестве источника углерода усваивает моно-, дисахара, спирты и соли органических кислот, в том числе и бензойную.

Для выявления азотобактера в почве и определения относительного его содержания можно использовать метод Виноградского на г елевых пластинах. Отмытые от следов хлора гелевые пластины пропитывают 3—5 мл питательной среды следующего состава (в г на 200 мл дистиллированной воды)

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(25.08.2019)