медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

рии, выделяющие фосфатазу, они развиваются на этой среде и отщепляют фосфорную кислоту, образующую вокруг колоний зону растворения мела. На такой среде Р. Л..Менкина выделила культуру, состоящую из крупных спороносных палочек, соединенных попарно и в виде коротких цепочек (рис. 31), идентифицированную как Вес. megaterium var. phosphaticum.

Дальнейшие исследования показали, что Вас megaterium не единственная форма, способная отщеплять фосфорную кислоту из органофосфатов. Имеются бесспоровые палочки (типа Pseudomonas), также участвующие в мобилизации фосфорной кислоты из липидов и других фосфорорганических соединений.

Мобилизация доступных форм фосфора из растворенных солей фосфорной кислоты. Значительный процент фосфора в почве находится в виде трикальциевых фосфатов Cas(P04)2 и других труднорастворимых солей фосфора. Наличие специфичных микроорганизмов, растворяющих трикальциевые фосфаты, не установлены. Микроорганизмы в этом процессе участвуют косвенно. Так, нитрифицирующие бактерии, окисляя аммоний,

139

Глава XI

ОБЩИЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЧВЫ

1. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В лабораторной практике дли учета микроорганизмов в почве используют разные методы, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки.

Наиболее полно отражает численность клеток в почве метод прямого подсчета под микроскопом, требующий высокой квалификации исследователя. Для подсчета зародышей методом Виноградского в модификации Шульгиной на предметное стекло наносят определенный объем суспензии, готовят из него мазок на определенной площади, затем мазок фиксируют, красят и подсчитывают под микроскопом количество клеток микроорганизмов. Фиксация препарата не дает возможности выявить количество жизнеспособных клеток. В какой-то мере этот недостаток можно устранить при использовании метода флуоресцентной микроскопии.

Значительно меньшее число зародышей обнаруживается при посеве почвенной суспензии на жидких средах методом предельных разведений, но он более удобен и требует меньших затрат времени.

Широко применяется метод Коха для учета почвенных микроорганизмов. При этом почвенную суспензию из определенного разведения высевают на плотных питательных средах. Этот метод дает возможность убедиться в наличии живых зародышей, выявить их качественный состав и выделить чистые культуры. Этим методом выявляется больше зародышей, чем методом предельных разведений на жидких средах.

Для определения относительной заселенности той или иной группы микроорганизмов в почве используют меСЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

1*1

Среда II (в г на 1 л дистиллированной воды): глюкоза— 10; натрий лимоннокислый—11,2; КН2Р04- -2,38; К2НР04-5,65; (NH4)2S04 -2.64; MgCl2-l,21; ZnSO4-0,012; FeS04—0,11; CuS04—0,006; MnC03- 0,0012; агар— 20,0.

Микроорганизмы, участвующие в минерализации гумусовых веществ (автохтонной микрофлоры), обнаруживают на следующих средах.

1. Водный агар (по Эрскову). К I л водопроводной воды прибавляют 2—2,5% хорошо отмытого агара и стерилизуют при 120°С в течение 20 мин.

2. Агаризованная почвенная вытяжка.. К 1 л почвенной вытяжки добавляют 0,5 г КгНР04 и 20—25 г агара. Среду стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин. Почвенную5 вытяжку лучше готовить по Фишеру: к 1 кг почвы с высоким содержанием перегнойных веществ (гумуса) приливают 1 л 0,1 %-нсго раствора соды (Na2C03) и нагревают в автоклаве при 115СС 30 мин. Вытяжку фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Если фильтрат получается мутным, его осветляют кипячением с тальком и снова фильтруют. 100 мл экстракта разбавляют в 900 мл воды.

3. Исследования (Теппер, 1963) показали, что представители автохтонной микрофлоры лучше выявляются на нитрит ном агаре, приготовленном по методу Внноградского, так как нитрит ингибирует рост бациллярных .форм, подавляющих развитие микроорганизмов автохтонной группы.

Азотобактер и олигонитрофильные микроорганизмы, в .том числе дрожжи Lipomyces, учитывают на среде Эшб и следующего состава (в- г на 1 л дистиллированной воды): сахароза — 20,0; KsHPCV -0,2; MgSO4-0,2; NaCl—2,0; KsSC4 — 0,1; CaCOs —5,0; агар—20,0.

Миксобактерии из почвы и других мест обитания выявляют на средах, рекомендуемых А. А. Имшенец-ким и Л. И. Солнцевой.

1. Навозный я г я р. Берут 100 г кроличьего навоза и отваривают в 1 л водопроводной воды. К полученному отвару (после фильтрации через марлю) добавляют 5 г крахмала, 20 г агара и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

2. Грибной агар. 50 г измельченного подберезовика или подосиновика отваривают в 1 л водопроводной воды. Полученный отвар фильтруют. В фильтрат

143

вносят 5 г крахмала и 20 г агара, стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

3. Картофельный агар.

Микроскопические грибы чаще обнаруживают на с у с л о-а rape, но можно использовать также кислую среду Чапека.

Для приготовления сусло-агара берут 7-баллииговое сусло, разводит в 3 раза водой и добавляют 2% агара. Среду стерилизуют в автоклаве (при 0,5 атм 30 мин) или кипятильнике Коха при температуре 100°С в течени

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(20.02.2019)