медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

е 30 мин 3 раза через сутки (дробная стерилизация).

Перед добавлением к почвенной суспензии, внесенной в чашки Петри, расплавленного сусло-агара к нему приливают 2 мл стерильной молочной кислоты (на 1 л субстрата) или 0,5 г стерильной лимонной кислоты.

При приготовлении среды Чапека для грибов вереде, подготовленной для выявления актин ом ицетов, двух-замешенный фосфорнокислый калий заменяют эквивалентным количеством однозамещенного фосфорнокислого калия.

Перед тем как среду Чапека внести в чашки Петри, к расплавленному агару этой среды добавляют 4 мл (на I л) стерильной концентрированной молочной кислоты.

Группы микроорганизмов, учитываемые на жидких средах (методом предельных разведений). Аэробные

целлюлозоразрушающие микроорганизмы количественно можно учесть на среде И м ш е н с ц к о г о и Солнцевой, содержащей (в %): МаКОэ 0,25; KsHP04— 0,1; MgSOi—0,03; NaCl—0,1; СаС12-0,01; СаССу-0,5; добавлять мел не обязательно.

По 5 мл среды разливают в пробирки, а в качестве источника углерода опускают полоску фильтровальной бумаги (длиной 7—10 см), не содержащей крахмала (реакция с раствором Люголя). Полоска на 4—5 см должна выступать над средой.

Нитрифицирующие бактерии учитывают на ж и д-кой среде Виноградского для бактерий первой фазы нитрификации (стр. 118).

Среды разливают по 25 мл в эрленмейеровские колбы емкостью 100 мл и стерилизуют.

Денитрифицирующие бактерии выявляют чаще на среде Гиль та я. Готовят два раствора: 1) KN03—

144

2,1 г; аспарагин—1,0 г; дистиллированная вода — 250 мл; 2) лимоннокислый натрий — 5,0 г; КН2Р04— 2,0; MgSGy—2,0; СаС12—2,0, FcQ3- следы; дистиллированная вода — 500 мл.

Растворы сливают вместе, устанавливают рН 6,8—7,0 и объем доводят дистиллированной водой до 1000 мл. Хорошие результаты получаются и на более простой среде (стр. 120).

Анаэробные ааотфиксатори (Clostridium pasteuria-пит) учитывают на среде Виноградского следующего состава (в г на 1 л дистиллированной воды): глюкоза — 20,0; К2НР04- 1,0; MgS04—0,5; NaCl—0,5; CaCOs—5,0; MgS04--следы; FeS04 — следы.

Среду разливают по 9 мл в пробирку (половину пробирки). Перед стерилизацией в пробирку опускают опрокинутый поплавок для улавливания газов (стр. 83).

Группы микроорганизмов, выявляемые методом обрастания комочков почвы, Аэробные целлюлозоразрушающие микроорганизмы. Для определения качественного состава и относительной оценки населенности их в почве используют гелевые пластины или пластины из «голодного» агара.

На пластинах помещают кружок стерильной фильтровальной бумага, увлажненной стерильной средой Виноградского (стр. 105) или средой Гатчинсона, затем по фильтровальной бумаге раскладывают («по трафарету) 50 комочков почвы диаметром 1—2 мм.

Среда Гетч«неона (в г на 1 л дистиллированной воды): NaNOs-2,5; КН2РО4-1,0; MgS04-7H20-0,3; NaCl—0,1; CaCb—0,1; FcCU- 0,01; рН среды доводят до 7,2 добавлением 20% раствора NasCCy

Нитрифицирующие бактерии выявляют на гелевых пластинах, пропитанных 5 мл питательной среды Виноградского (стр. 118) для первой или для второй фазы нитрификации.

Пластины подсушивают в сушильном шкафу при температуре 50°С до образования блестящей (эмалевой) поверхности. По ней раскладывают комочки почвы диаметром 1—2 мм.

Азотобактер также хорошо выявляется на гелевых пластинах, пропитанных 3—5 мл питательной среды Виноградского (стр. 128).

10 Tei.nep Е. 3. 145

Затем методом разведения готовят суспензии, содержащие разные количества почвы.

Одновременно со взятием 10 г почвы для анализа из средней пробы отбирают 10—20 г почвы для определения влажности, так как полученные данные пересчитывают на 1 г абсолютно сухой почвы.

Д. Г. Звягинцев (1966) установил, что значительно больше зародышей выявляется в почве, если навеску ее предварительно поместить в стерильную фарфоровую чашку или ступку, увлажнить (0,4—0,8 мл воды или 0,1%-ным раствором пирофосфата Na4P20j на I г почвы) и в течение 5 мин растирать стерильным резиновым пестиком или пальцем в стерильной резиновой перчатке до пастообразного состояния. Перед приготовлением суспензии для каждого образца готовят две стерильные колбы емкостью 250 мл; одна содержит 100 мл стерильной водопроводной воды, другая —• пустая. Водой из первой колбы растертую почвенную массу смывают в пустую стерильную колбу. Колбу с почвенной суспензией встряхивают на протяжении 5 мин, оставляют на 30 с и готовят разведения, содержащие разные концентрации почвы. Последующие колбы встряхивают в течение 1 мин.

1 мл суспензии в первой колбе, приготовленной тем или иным методом, соответствует разведению 10-'. Последующие разведения (10-2; 10-*; ICH; 10~s; Ю-6 и т. д.) лучше делать в колбах на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды.

147

Из каждого предыдущего разведения отдельной стерильной пипеткой берут 10 мл почвенной суспензии и переносят в следующую колбу, содержащую 90 мл воды. Каждый раз пипетку ополоскивают и отставляют. Последующие колбы встряхивают в течение 1 мин.

10*

микробов (обычно среду упаривают в сушильном шкафу при

страница 49
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(20.08.2019)