медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

50°С до образования эмалевой поверхности). По поверхности раскладывают по трафарету 40 -50 комочков почвы диаметром 1—2 мм. Чашки помешают во влажную камеру и ставят в термостат. Если в комочках почвы находятся соответствующие зародыши, то они начинают развиваться и формируют вокруг комочков колонии. Затем вычисляют процент обросших комочков почвы от их исходного числа.

После определенного срока инкубации при температуре 28—30"С культуры анализируют.

5. УЧЕТ РАЗЛИЧНЫХ ГРУПП МИКРООРГАНИЗМОВ

Учет на плотных средах (на 1 г абсолютно сухой

?почвы). После инкубации засеянные среды вынимают из термостата и в них подсчитывают число колоний.

Одновременно после сушки бюксов с навесками почвы при температуре 105еС До постоянной массы определяют содержание абсолютно сухой почвы в. 1 г анализируемой сырой почвы.

При подсчете колоний на богатых плотных питательных средах (МПА, МПЛ-1 сусло-агар; КАЛ, сусло-агар, среда Чапека, среда Эшби и т. д.) закрытые чашки Петри просматривают в проходящем свете и с внешней стороны их колонии отмечают чернилами или тушью. Чтобы не пропустить мелкие колонии, чашки дополнительно просматривают под лупой. Желательно для подсчета использовать специальный прибор с арифмометром. Если на чашке больше 200 колоний, то их можно подсчитывать с помощью- камеры Вольф юге л я (рис. 8). Число колоний на бедных средах (нитритный агар, «голодный» агар, агаризованный почвенный экстракт и т. д.) определяют под микроскопом (окуляр ЮХ н объектив ЗХ, в крайнем случае окуляр ЮХ и объектив 8X1В чашках Петри сначала подсчитывают 100 полей зрения, затем выводят среднее арифметическое на одно иоле. Для определения числа колоний на чашке, среднее число их на одно поле зрения переводят на общую площадь чашки. Устанавливают площадь чашки Петри (Р) и площадь поля зрения (/;), с тем, чтобы выявить, сколько полей зрения используемой системы помещается на площади чашки, для чего площадь чашки делят на площадь поля зрения и получают коэффициент А'

148

(4-*).

на который умножают среднее число колоний

в поле зрения на чашке. Площади чашки Петри и поля зрения определяют по формуле я/"2.

Диаметр чашки Петри устанавливают визуально, а поля зрения — под микроскопом, используя для малых увеличений миллиметровую бумагу, а для больших (объективы 40 и 90) — объектный микрометр.

Подсчитав при поверхностном посеве число колоний на чашке, находят содержание зародышей в 1 мл соответствующего разведения, умножив число колоний на 20 (так как посеяно было 0,05 ял), а чтобы определить количество клеток микроорганизмов в 1 г сырой почвы, полученное число клеток в 1 мл умножают па степень разведения (103, Ш4, 10s и т. д.).

Для учета числа зародышей в 1 г абсолютно сухой почвы число клеток в 1 г сырой почвы делят на количество абсолютно сухой почвы, содержащейся в 1 г сырой почвы.

Пример. Установлено, что при поверхностном посеве почвенной суспензии из разведения 10~8 число колоний на чашке равно 52;

влажность почвы 25% {при такой влажности 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы). Число клеток иа 1 г абсолютно сухой почвы

52.20.1000

А = „ = 1 386 666.

0.75

При глубинном посеве число колоний на I г абсолютно сухой почвы подсчитывают таким же образом, но не умножают иа 20, так как при высеве используют 1 мл суспензии.

Подсчет желательно вести и на 1 г гумуса или на 1 мг азота. В этих случаях параллельно определяют содержание гумуса или азота в почве.

Учет микроорганизмов на МПА проводят визуально на четвертый день после посева. При наличии колоний Вас. mycoides количество микробов определяют на второй или третий день. После подсчета всех колоний на чашке их группируют по культуральным признакам и определяют роды (а иногда и виды) микроорганизмов, входящих в состав этих колоний.

Учет микрофлоры на крахмало-аммиачнои агаре. Колонии на таком агаре подсчитывают на 7—10-й день. Из общего количества микроорганизмов отдельно учитывают: 1) пигментные — желтые и другие микобакте150 рии, образующие ' мелкие куполообразные колонии; 2) Actinomyces (—Streplomyces) — организмы с хорошо развитым несептировйнным мицелием и особыми органами плодоношения.

Отмечают окраску колоний, воздушного мицелия (серый, белый, зеленовато-серый, розовый) и среды (выделение пигмента в субстрат). Для описания пигментации можно использовать специальные пособия для определения цвета.

При дифференциации актиномицетов описывают консистенцию колоний (плотные, кожистые, рыхлые), поверхность (мучнистая, бархатистая )и запах (землистый, эфирный, фруктовый) колоний.

Учет микроорганизмов на бедной среде (нитритном агаре). Колонии на бедной среде учитывают под микроскопом на 6- 7-й день культивирования. Если на колониях появляются Protozoa (о их наличии судят по образованию цист, которые хороню просматриваются при малом увеличении объектива), подсчет проводят после шести дней инкубации.

При дифференциации колоний по культуральным признакам выделяют следующие роды.

1. Nocardia(= Proaciinomyces) — колонии пастооб

страница 50
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.04.2019)