медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

а заливают парафином для предохранения суспензии от высыхания. В этом случае непосредственно под микроскопом, используя деления у микровинта, определяют слой жидкости между предметным и покровным стеклом.

Микроскопируют препарат с объективом 90Х (апертура 1,3) или 60Х (апертура 1,0). Применяют нефлуореспирующее парафиновое масло, которое можно приобрести в аптеке. Лучше использовать окуляр,, увеличением 5—7Х. В него вставляют из картона бленду*, которая в 2—3 раза уменьшает площадь поля-зрения микроскопа. Ее определяют объективным микрометром,

В поле зрения должно находиться 10—20 клеток микроорганизмов. Если их меньше или больше, следует изменить концентрацию суспензии. Для большей достоверности рекомендуется просчитывать 100—500 полей зрения.

Окрашивают препараты за 10—20 мни до их просмотра, так как окрашенные клетки остаются живыми, и могут размножаться.

Студентам рекомендуется применять метод прямого счета бактерий Виноградского в модификации Шульгиной.

Материалы и оборудование. Средняя почвенная проба, врлеи-мейеровсжие колбы емкостью 250 мл, содержащие 50 мл стерильной' водопроводной воды, пустые стерильные колбы на 250 мл, 0,1%-иыА раствор пирсфосфата натрия, фарфоровая ступка е пестиком, спирт

96%-ный, хорошо обезжиренные предметные и покровные стекла, стерильные градуированные пинетки на I мл, 0,1%-ими агар, карболовый раствор эритрозина. трвфареты на 4 си*, объектный микрометр, микроскопы и все необходимое для микроскопирования.

162

Глава JC11

ИЗУЧЕНИЕ ЦЕНОЗОВ МИКРООРГАНИЗМОВ

1. МЕТОД ОБРАСТАНИЯ СТЕКОЛ ПО Н. Г. ХОЛОДНОМУ

На ровной поверхности почвы делают ножом раз* рез, глубина которого зависит от исследуемого почвенного горизонта. Отмытые и обезжиренные стекла плотно прикладывают к вертикальной- стенке разреза. Одновременно закапывают несколько стекол, плотно прижимая их к стенке. В пахотном слое стекла закапывают на 3—5 см ниже поверхности. Сверху разрез закрывают почвой и место, где заложены стекла, отмечают этикеткой. Стекла выдерживают в почве в зависимости от задачи исследования от недели до нескольких месяцев.

Затем с тыльной стороны стекла почву откапывают, стекло откидывают от стенки и вынимают. Нижнюю сторону вытирают сухой тряпкой, а верхнюю — высушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки. После фиксации стекло погружают в воду верхней 'стороной вниз, не доводя до дна. При этом крупные частицы почвы, отмокая, падают на дно, а фиксированные микроорганизмы и мелкие частицы остаются на стекле/ После промывки препарат погружают в раствор карбс- ? левого эритрозина- и выдерживают с- красителем от 30 мин до 24 ч.

Окрашенные препараты исследуют под микроскопом с иммерсионной системой объектива. Конденсор . также погружают в масло.

При микроскопировании отмечают характер микро-. флоры, плотность обрастания и доминирующие формы. Отдельные ассоциации можно запечатлеть, используя: микрофотосъемки.

2. ИЗУЧЕНИЕ МИКРОБНЫХ ЦЕНОЗОВ В ПОЧВЕ ПО МЕТОДУ ПЕРФИЛЬЕВА И ГАБЕ

Учитывая, что в естественных условиях в почве микроорганизмы развиваются в основном в капиллярах, стенки которых представляют почвенные частицы, Б. В. Перфильев и Д. Р. Габе сконструировали капиллярный прибор — педоскоп (рис. 35). Он'состоит из наборов лятиходовых капиллярных ячеек _ с тонкой

164

кровлей, вставленных в стеклянную обойму или держатель, В него можно вставить 6—7 ячеек. Держатель представляет собой стеклянный желоб длиной 70 мм, шириной 8—11 мм, с плоским дном и наклонными (под углом 45°) боковыми стенками.

Оси каналов капилляров должны быть ориентированы перпендикулярно к оси держателя.

Педоскопы нумеруют. Цифры на стекло износят тушью, сверху покрывают клеем БФ-2 и помещают в сушильный шкаф при температуре 170°С. Пленка становится водонепроницаемой. По нескольку педоскопов, завернутых в бумагу, помещают в чашки Петри и стерилизуют сухим жаром.

В рыхлые почвы педоскопы вставляют легко, в угь лотиенные сначала вводят специальный металлический пробойник — металлический стержень с заостренным концом, сделанный по величине педоскопа и вставленный в тонкостенный футляр из жести.

После экспозиции в течение 30 дней или более педоскопы извлекают из почвы, поверхность их тщательно очищают от приставших частиц и рассматривают микроорганизмы, развившиеся в каналах капилляров.

Педоскопы, извлеченные из почвы, устанавливают на специальный столик, предохраняющий содержимое капилляров от высыхания. Микробы в педоскопах могут быть зафиксированы и окрашены. Фиксируют их в парах осьмиевой кислоты (ячейки на 10 мин помещают в чашки Петри, в которые налито несколько капель 2%-ной осьмиевой кислоты) или в парах 40%-ного раствора формалина. Красят эритрозином, промывают в стакане с водой. Ячейки с помощью канадского бальзама укрепляют на тонкой стеклянной пластине (0,2—0,3 мм толщиной) и в специальном держателе ставят на крестообразный столик микроскопа. В каналы капилляров вводят кедровое масло и просматривают с иммерсионной системой объектива.

«5

В. МЕТОД КАПИЛЛЯРОВ ПЕРФИЛЬЕВА I

страница 54
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(18.02.2019)