медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ки индикатора, ' ..

4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММОНИФИЦИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Для определения аммонифицирующей способности микроорганизмов М. В. Федоров рекомендует приготовить минеральную питательную среду следующего состава (в г на 1 л дистиллированной воды): КзНРО« — 2; КН2РО« — 2; MgSOj — 0,3. К этой среде добавляют пептон и глюкозу с таким расчетом, чтобы отношение С! N было равно 5:1; 10: 1; 15:1; 2ft: 1 и 30:1. Источником азота служит пептон. При желании можно использовать и другие источники азота (гороховую и люпиновую муку, гуматы). На 100 мл субстрата берут 1 Г пептона, содержащий 0,15 г азота и 0,5 г углерода. Для создания С;N = 5:1 к 100 мл среды добавляют

171

0,625 г глюкозы; для С; N = 10:1—2,5 г; для более широкого отношения С : N соответственно увеличивают содержание глюкозы. Питательную среду разливают по 100 мл в колбы Эрлеимейера емкостью 300 мл и стерилизуют. Затем . среду заражают исследуемыми микроорганизмами и ставят на неделю в термостат при 28—30°С. Опыт проводят минимум в двух повторцо-стих.

После инкубации накопившийся аммиак определяют диффузионным методом в чашках Конвея. Параллельно устанавливают общее количество выросших клеток методом прямого счета под микроскопом или методом питательных пластин на МПА.

S. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРИФИЦИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ

ПОЧВЫ '

Из почвенного образца, просеянного через сито с отверстиями 2 мм, отбирают навеску в 100 г и помещают в стерильную эрлеумейеровскую колбу емкостью 250 мл. Почву смачивают до 65% общей влагоемкости, добавляют к ней 0,1 г (NH,)aS04 и 0,2 г СаСОа, перемешивают, закрывают ватной пробкой, взвешивают и помещают в термостат с температурой 27—28°С на 30 дней. Контролем служит почва без сернокислого аммония.

Влажность почвы должна быть постоянной. Для этого через каждые семь дней колбы взвешивают и стерильной дистиллированной водой доводит до первоначальною уровня.

По окончании опыта определяют нитрат в опытных и в контрольных почвах по методу Грандваль — Ляжу.

6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДЕНИТРИФИЦИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВЫ

При определении денитрифицирующей активности

почвы возникают большие затруднения, так как способность восстанавливать нитраты не единственная

функция денитрифицирующих бактерий в почве. Они с

таким же успехом развиваются в присутствии молекулярного, кислорода, окисляя белки, жиры и другие соединения. • . . I

Для определения денитрифицирующей активности почвы М. В. Федоров рекомендует навеску свежей почвы (50 г) поместить в стерильную колбу объемом 250 мл, увлажнить ее до 60% общей влагоем кости (стерильной водой) и добавить 0,1—0,2 г нитрата. После 14-дневного компостирования одновременно устанавливают количество нитрата, нитрита и аммиака. Сравнивая эти показатели у разных почв, можно выявить их потенциальную денитрифицирующую активность.

Определение денитрифицирующей активности почвы и изучение смены процессов в замкнутой системе почва —- атмосфера, путем применении ацетилена по методу Федоровой*

Используемый в микробиологической практике для определения денитрифицирующей активности почв метод сравнении данных по количеству нитрата, нитрита и аммония в разных образцах после инкубации их с селитрой в течение 14 суток громоздок (требует многих химических анализов) и недостаточно точен. За такой длительный срок в почве может произойти смена многих процессов, направленность и интенсивность которых определяются природой образца. Таким образом, в каждом конкретном случае соотношение анализируемых азотсодержащих соединений может быть результатом не только активности денитрификаторов, но и неучтенной активности микроорганизмов других физиологических групп, которые также принимают участие в превращениях азота.

Применение Р. И. Федоровой ацетилена (QHs) позволяет вычленить денитрификацию из прочих метаболических реакций и количественно оценить процесс методом газовой хроматографии.

При денитрификации редукция нитрата идет до газообразных продуктов:

NOj—<-NOs—*-NO™'NjO—*Ni . В опытах с растущими культурами денитрифицирующих микроорганизмов и в условиях их активности в почвах оказалось, что небольшие концентрации ацетига;

173

лена иигибируют редукцию закиси азота (N20) денитрификаторами без заметного угнетения восстановления других продуктов диссимиляции N03~.

Известно, что денитрификация, как доминирующий процесс, закономерно сменяется азотфиксацией, Это обусловлено изменением соотношения легкодоступного связанного азота н углерода и уровня окислительно-восстановительного потенциала, который в значительной мере определяется присутствием нитрата в среде. Активность нитрогеназы подавляется нитратами, и азотфиксаторы, обладая нитрат- и нитритредуктазой предпочтительнее используют нитраты и нитриты по сравнению с NjO и N}.

Таким образом, при наличии в почве NOa~ и N0f~ азотфиксаторы размножаются, но не фиксируют газообразный азот. В замкнутом объеме в этот период происходит накопление NsO За счет активности денитрифицирующих микроорганизмов и СОг в результате интегральной жизнедеятельност

страница 57
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(18.02.2019)