медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

предметное стекло, в центре которого находится покровное стекло с линейкой (шкала из 100 делений). Общая длина шкалы объектного микрометра 1 мм, величина одного деления шкалы 10 мкм (0,01 мм). Объектный микрометр помещают вместо препарата на столик микроскопа -и сначала фокусируют при малом увеличении. Изображение линейки перемещают в центр поли зрения и только после этого меняют объектив на тот, при котором определяли размеры клеток. Перемещая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают объектный и окулярный микрометры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления окулярного микрометра проводят по принципу «оииуса, т. е. совмещают одну из черточек шкалы окулярного микрометра с какой-нибудь черточкой объектного микрометра и затем находят следующее совмещение. Устанавливают, скольким делениям объектного микрометра соответствует одно деление окулярного микрометра. Допустим, два деления объектного микрометра (20 мкм) соответствуют пяти делениям окулярного микрометра, тогда одно деление окулярного микрометра равняется 4 мкм (20:5). Если теперь .на столик микроскопа поместить препарат с клетками микроорганизмов, то при том же увеличении можно измерить величину клеток.

Для этого определяют, какому числу делений окулярной линейки соответствует величина измеряемого объекта, и умножают это число на цену деления окулярного микрометра.

I. МИКРОСКОПИЯ В ТЕМНОМ ПОЛЕ

Метод наблюдения в темном поле, разработанный австрийским ученым Зигмонди, дает возможность повысить разрешающую способность микроскопа в 10 раз. В основе метода лежит явление Тиндаля — освещение объекта косыми лучами света. Эти лучи, не попадая в объектив, остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит темным. В то же время оптически неоднородные клетки, находящиеся в поле зрения и попадающие в сферу прохождения лучей, отклоняют их в такой степени, что лучи попадают в объектив. Тогда наблюдатель видит в темном поле интенсивно светящиеся объекты, поскольку лучи света идут именно от них.

Темное поле зрения можно создать в светооптичес-ком микроскопе, заменив обычный конденсор темно-вольным р применив для освещения источник СИЛЬНОГО света. Однако эффект темного поля может быть достигнут только в том случае, если апертура конденсора превышает на 0,2 0,4 единицы апертуру объектива. Для исследования в темном поле рекомендуется конденсор с апертурой около 1,2 и объективы с апертурой 0,65—0,85. Важно обращать внимание на толщину предметных ,(0,8—1,2 мм) и покровных (0,17 мм) стекол, толщину препарата (в воде) и чистоту используемых стекол. Чем толще препарат и чем больше в нем посторонних частиц, преломляющих световые лучи, тем менее контрастно получаемое изображение, так как каждая частица, отражая лучи, освещает поле зрения.

Метод используется с целью исследования живых клеток микроорганизмов. Особенно он ценен для функционально-морфологического изучения крупных объектов типа дрожжей. Цитоплазма дрожжевых организмов (при условии яркого источника света и хорошего апо-хроматического иммерсионного объектива) слабо и равномерно' опалесцирует. На ее фоне четко различаются черные оптически пустые вакуоли. Капли .Жира выделяются как сильно блестящие гранулы. Протопласт погибающих клеток опалесцирует молочно-белым цветом.

3. ФАЗОВО-КОНТРАСТНАЯ МИКРОСКОПИЯ

Человеческий глаз выявляет только различия в длине (даете) и амплитуде (интенсивности, контрастности) световой волны, но не улавливает различий в фазе.

Почти все живые клетки прозрачны, так как световые лучи, проходя через живую клетку, «е меняют своей амплитуды, хотя и изменяются по фазе.

Превратить «фазовый» (неконтрастный) препарат в «амплитудный» (контрастный) можно, либо окрашивая объект (для живых клеток этот прием малопригоден), либо снижая апертуру конденсора путем прикрывания

16

г Теплср р. 3.

17

диафрагмы (прием также в^желателег, так как снижается разрешающая способность микроскопа).

Метод фазово-контрастноп микроскопии, предложенный голландским физиком Цернике для наблюдения за прозрачными объектами, основан на преобразовании фазовых изменений, претерпеваемых световой волной при прохождении через объект, в видимые амплитудные, с помощью специального оптического устройства. Если в объектив обычного микроокопа вмонтировать специальный диск — фазовую пластинку с кольцом (получается путем напыления диска солями редких металлов толщиной в «еоколько десятых микрометра), а в конденсор — кольцевую диафрагму (непроницаемую Для лучей света пластинку, в которой имеется прозрачная щель в виде кольца), так чтобы через конденсор и объектив проходило лишь кольцо света, которое затем совмещается с кольцом фазовой пластинки объектива, то фазы проходящего светового луча сдвигаются (обычно на длины волны) и - можно наблюдать эффект фазового контраста. Фазовые изменения переходят в амплитудные, и препарат становится контрастным.

Для проведения исследований необходимо в дополнение к световому микроскопу иметь фазово-контраст-ное

страница 6
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.02.2019)