медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

вы для определения влажности).

Корни помещают в колбу со 100 мл стерильной водопроводной воды и взбалтывают в течение 2 мИн. Стерильным крючком (приготовленным из обычной проволочной иглы) корни извлекают из колбы и переносят последовательно во вторую, третью, четвертую, пятую, шестую и седьмую колбы, также содержащие по 100 мл стерильной водопроводной воды. В каждой колбе корни отмывают по 2 мин. Желательно, чтобы- в последней колбе (7-й) в воду перед стерилизацией было добавлено 3—5 г песка.

Для качественного анализа бактерий ризосферы и иа корнях из каждой колбы отдельно стерильной пипеткой берут 0,05 мл отмывной воды, наносят на поверхность питательной пластины (МПА) и отдельным шпателем, держа полуоткрытую чашку около пламени горелки, втирают досуха. Чашки помещают в термо12* 17?

стат при температуре 28- 30°С. Спустя 3 -5 суток чашки можно анализировать.

По мере отмывания корней численность бактерий не убывает, а в ряде случаев даже увеличивается. При этом в чашках с посевом из первых отмываний много крупных колоний, состоящих из спороносных форм микроорганизмов, а по мере отмывания количество колоний бациллярных форм уменьшается и возрастает число мелкоточечных колоний, представляющих ' неспороносные формы рода Pseudomonas и микобактерий. Колонии микобактерий часто окрашены в желтый или оранжевый цвета.

Для определения количества микроорганизмов в ризосфере и на корнях суспензию из первого отмывания дополнительно взбалтывают 5 мин, затем из нее готовят разведения, из которых делают поверхностные посевы. Содержимое остальных шести колб сливают вместе и также приготовляют последовательные разведения; из них проводят поверхностные посевы иа МПА.

Для подсчета зародышей в 1 г абсолютно сухой почвы ризосферы число колоний на чашке умножают на 20 (чтобы определить число зародышей в 1 мл) и на степень разведения, а затем делят на массу абсолютно сухой почвы ризосферы. Количество ризосфер ной почвы, попавшей с корнями в первую колбу, находят по разности первоначальной навески и навески отмытых корней (для чего из последней порции отмьшной воды корни извлекают, помещают на фильтровальную бумагу для удаления воды и взвешивают).

При определении количества микроорганизмов на 1 г корней число колоний, выросших на чашке, умножают на 20, иа степень разведения и на 600 (6 смывов по 100 мл в каждой) и делят на массу сырых корней.

В зависимости от задач, поставленных исследователем, можно использовать различный набор сред для культивирования микроорганизмов, развивающихся в корневой зоне растений. В лабораторной практике часто применяют следующие среды:

1. М я с о - п е и т о н н ы й агар с глюкозой (5— 10 г глюкозы на 1 л МПА).

2. Синтетическая среда Чапека для актином ицетов (см. стр. 142),

3. К р а х ма л о - а м м и а ч и ы й агар.

180

4. Среда Боннера (в г на 1 л дистиллированной

воды):

C«(NO,),-4H,0 . . 0,23 КаНРО, 0.012

KNO, 0,001 FeHSO,), .... 0,002

MfiSOiTHjO . . . 0,036 глюкоза 20,0

Ш 0,066 агар ...... 10—15

5. Нитритный агар.

6. По данным М. В. Федорова, хорошие результаты

получают при использовании среды, содержащей в качестве' источника углерода соль органической кислоты,

а в качестве источника азота наряду с минеральным

азотом аспарагин.

Состав среды (в г на 1 л дистиллированной воды) следующий:

яблочнокислый натрий 2С— 30 Са,(РО,), 0,5

«епарагнн . . . 0,5—1,0 MgbO, 0,5

KNO, ..... 0,5 FeSO. 0.1

КзНРО, .... 0,5—1,0 агар 15,0—20,0

Студентам микрофлору ризосферы и корней рекомендуется изучать методом последовательных отмываний при посеве на МПА.

Материалы и оборудование. Монолит с растениями (10x10 см) или вегетационный сосуд с растениями, пинцеты, ножницы, часовые стекла, колбы емкостью 250 мл, «держащие по 100 мл стерильной водопроводной воды (для последних разбавлений нужны колбы, в которых в 100 ил стерильной воды должно быть 3—5 г стерильного песка), крючки из проволоки, стерильные градуированные и т> ровские третей на 1 мл, стерильные шпатели, счетная камера . Вольфюгели, лупы, микроскопы и все необходимое для приготовления окрашенных препаратов и микроскопирования их, ежошенный МПА в пробирке.

3. ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ В ПОЧВЕ, ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИХ АКТИВНОСТИ И ВИРУЛЕНТНОСТИ

Выделение чистой культуры клубеньковых бактерий. От тщательно промытого в водопроводной воде кория бобового растения отрезают наиболее крупные клубеньки, промывают их в трех-четырех порциях стерильной воды и опускают в чашку Петри с 0,1 %-ным раствором сулемы. Покачивая чашку, выдерживают 5 мин, затем переносят клубеньки стерильным пинцетом в чашку Петри со стерильной водой, выдерживая

181

в ней 5 мин, затем переносят в чашку Петри со спиртом, где выдерживают I мин. Спирт удаляют обжиганием.

Далее стерильным пинцетом помещают клубеньки в стерильную чашку Петри и стерильным ножом ра

страница 60
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(23.04.2019)