медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

зрезают на части. Из содержимого клубенька берут бактериологической петлей небольшое количество взвеси, переносят в каплю стерильной воды на поверхность агаровой питательной среды в чашке Петри и размазывают шпателем. Этим же шпателем делают посев последовательно еще на двух пластинах.

В качестве питательной среды можно использовать среду Фреда: маннит {сахароза или глюкоза) — 10,0 г; КН2Р04 — 0,5 г; MgSO« —0,2 г; NaCl—0,1 г; СаСОз — 3,0 г; дрожжевая вода (рН 6,8) — 100 мл; агар—15 г; дистиллированная вода —0,9 л или бобовый агар: бобовый отвар*—1000 мл; сахароза —2 г; КН2Р04 1,0 г; MgS04 — 0,3 г; агар — 15,0 г.

Устанавливают рН до 7,0 (добавлением соды) и стерилизуют среду при 120°С в течение 30 мин. На этих средах клубеньковые бактерии образуют слизистые, беловатые, непрозрачные колонии, похожие на капли стеарина.

Из изолированной колонии с' однородным характером роста выделяют чистую культуру. Предварительно клетки просматривают под микроскопом, а затем из них делают отсев в пробирки на скошенный бобовый агар ЕЛЕ на среду Фреда.

Клубеньковые бактерии хорошо растут также на средах Лазаревой (КН2Р04 —0.5 г; MgSO< — 0,2 г; NaCl —0,2 г; MnS04 — 0,005 г; NIUMoQ4 — 0,002 г; маннит или сахароза — 10 г; дрожжевая вода— 100 мл, агар— 1,5%), Нор риса (KsHP04 —0,5 г; MgS04.7HsO — 0,8 г; NaCl — 0,2 г; FeCU —0,01 г; маннит — 10 г; свежеприготовленный дрожжевой экстракт— 100 мл на 1 л среды, рН 7,2).

Для медленнорастущих клубеньковых бактерий (сои, люпина) следует использовать среду И с в а р а-н а (маннит иди сахароза — 10 г, К2НРО4 — 0,5 г;

MgS04 — 0,2 г; NaCl — 0,1 г; глюконат кальция—1,5 г; FeCls —0,01 г; дрожжевой экстракт —2 г; агар — 2%

на 1 л среды).

Количественный учет клубеньковых бактерий в почве проводят методом Вильсона (Wilson, 1926) или его модификациями, например методом Красильникова и Кореняко (1940).

При использовании метода Вильсона (так же как и метода Красильникова и Кореняко) на стерильном субстрате выращивают стерильные семена бобовых растений, бактеризованные водными разведениями анализируемой почвы. По* существу, здесь используется метод определения клеток бактерий с помощью титра. Наблюдая за образованием клубеньков при инокуляции растений почвой в разных разведениях, устанавливают численность клубеньковых бактерий в почве и их видовую принадлежность. Пересчет клубеньковых бактерий на 1 г почвы проводят по таблицам Мак-Креди.

Для лучшего отделения клубеньковых бактерий от сапрофитной сопутствующей микрофлоры почвы Н. Ф. Быстрый (1941) рекомендует добавлять в питательную среду для ризобий кристаллический фиолетовый в концентрации 1 : 50 000 1 : 100 000 (краситель предварительно растворяют отдельно в этаноле), подавляющий развитие многих почвенных микроорганизмов и не влияющий на рост ризобий.

Для выделения клубеньковых бактерий из почвы можно использовать также среду Грэхема (Graham, 1969) следующего состава (в г на 1л): маннит и лактоза —по 0,5; КгНР04 — 0,5; NaCl и СаС12 — по 0,2; MgS04 и FeCI — по 0,1; дрожжевой экстракт — 0,5; агар — 20,0. После стерилизации в автоклаве к среде добавляют (в мг): циклогексимид — 200; пентахлор-н ит ро бензол—100; бензилпенициллин натрия — 25; хлоромицетии — 10; сульфатиазол — 25 и неомицин — 2.5.

Можно по желанию добавлять также конго красный— 2,5 мл I %-ного раствора, рН среды доводят до 7,0.

При выделении ризобий из почвы методами Быстрого или Грэхема необходима проверка действительной принадлежности выделенных бактерий к роду Rhiza-Ыит. Это осуществляется путем бактеризации выде183

ленными бактериями соответствующих видов бобовых растений.

В тех случаях, если наличие клубеньковых бактерий в почве не удается выявить ни одним из указанных методов, следует применять метод Емцева, Шильннковой, Агаджанян (1964), являющийся комбинацией методов Вильсона и Быстрого. Сущность метода заключается в следующем: на чашки Петри со средой Быстрого с кристаллическим фиолетовым высевается почва в разведениях от 1 :10 до 1 :100 ООО; с поверхности среды стерильной водой смываются выросшие колонии бактерий; полученными суспензиями бактеризуются семена. Метод дает возможность обогащения суспензии клетками клубеньковых бактерий при некотором подавлении кристаллическим фиолетовым сопутствующей микрофлоры. Метод дает значительное увеличение количества клубеньков по сравнению с заражением семян соответствующими нсобогащенными суспензиями.

Отбор активных (или эффективных) культур клубеньковых бактерий. Некоторые клубеньковые бактерии образуют клубеньки, но усвоения молекулярного азота при этом" в бобово ризобиалыюм симбиозе не происходит или происходит в слабой степени и потребность растений в азоте не удовлетворяется. Такие клубеньки являются неактивными или неэффективными. Оки обычно мелкие, разбросаны по всему корню, содержат мало бактероидной ткани и быстро разрушаются. Бывают случаи, когда клубеньковые бактерии образуют клубеньки, паразитирующие на растении. В связи с этим для получения высоких урожаев важно подобрать высокоэффективны

страница 61
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(21.08.2019)