медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

е культуры, изучить их особенности. При отборе высокоэффективных клубень-" ковых бактерий основным наиболее надежным критерием служит результативность их влияния на урожай растений и содержание в них азота. Предварительный отбор можно проводить сначала в условиях лабораторного, затем вегетационного опыта, окончательно эффективность проверяется в условиях полевых опытов.

Подбор активных культур клубеньковых бактерий по 3. Г. Разумовской проводится в условиях лабораторного или вегетационного опыта. Для этого можно использовать большие пробирки со средой следующего состава: KJJHPO* — 1.0 г; MgS04—1,0 г;СаС03—0,5 г;

FeS04; H3B03; MnSO« —следы; агар — 1,0 г; дистил? лироканной воды— 1000 мл.

Питательную среду разливают в пробирки невысоким слоем (4 см высоты), закрывают ватными пробками и стерилизуют при 120Х в течение 20 мин. Одновременно стерилизуют семена. Существуют разные способы стерилизации семян. Один из наиболее, распространенных способов следующий: скачала семена обрабатывают спиртом (для лучшей их смачиваемости), затем промывают стерильной водой и помещают в большие стерильные колбы с 0,1 %-ным раствором сулемы (или 1 % -нон бромной водой) и выдерживают мелкие семена в течение 2—3 мин и крупные в течение 4—5 мин. По прошествии срока обработки семена неоднократно промывают стерильной водой, соблюдая правила асептики. Стерилизовать семена можно, по рекомендации Натмана (Nutman, 1949), концентрированной серной кислотой. Условия обработки следующие: мелкие семена погружают иа 1—2 мин, крупные на 3—5 мни в серную кислоту, налитую в коническую колбу емкостью 0,7—1,0 л, слегка покачивая колбу. По прошествии срока обработки кислоту сливают и в колбу сразу же вливают большую порцию стерильной водопроводной воды (если приливать воду медленно или вливать небольшое количество воды, семена могут перегреться). Воду сменяют несколько раз. После окончания промывки поверхность семян должна быть нейтральной (по реакции с лакмусовой бумагой или иа вкус).

Можно стерилизовать семена парами хлороформа (20 мин) или диоцидом (20 мин, 1 :1000). Проверка стерильности семян проводится при посеве части семян на МПА или бобовый агар. После прорастания семян их перекосят стерильным пинцетом в пробирки с агаровой средой, куда одновременно с посевом семян вносят 1 мл взвеси культуры клубеньковых бактерий. Пробирки снаружи обертывают плотной бумагой так, чтобы она закрывала слой агара и семена (для создания корням затемненных условий). Растения выращивают при естественном или искусственном освещении. По мере развития растений проводят наблюдения за образованием клубеньков, за массА растений и содержанием в них азота. Контролем служат пробирки, в которые не вносили бактерий. Активные или эффектив185

1Е4

ные клубеньковые бактерии Характеризуются высокой азотфиксирующей способностью в симбиозе. Клубеньки активного бобово-ризобнального симбиоза обычно крупные, с большим количеством бактерондиой ткани, располагаются они на главном корне у его основания, имеют розовую окраску, обусловленную наличием лег-гемоглобина, и довольно долго функционируют, разрушаясь в период плодоношения растений.

Для определения эффективности бобово-ризобиаль-ного симбиоза по нитрогеназиой активности можно применить метод Парнйской и Гореловой («Микробиология», 1975, т. 44, вып. 6).

Определение вирулентности клубеньковых бактерий. Для того, чтобы обеспечить высокоэффективный симбиоз, необходимо, чтобы активные культуры клубеньковых бактерий обладали еще высокой вирулентностью — способностью проникать в клетки корня растения, размножаться там и образовывать клубеньки. Для определения вирулентности культур ризобий необходимо применять стерильный песчаный субстрат или стерильную агаризоваииую среду, в которых выращивают предварительно простерилизованные семена растений (стр. 185), бактеризованные монокультурами ризобий. Вирулентность определяют ло сроку появления первых, видимых невооруженным глазом клубеньков.

Отбор вирулентных культур клубеньковых бактерий мелкосеменных растений можно также осуществить, используя метод Фэреуса (Ш и л ь н и к о в а В. К., Нестерова И. М. — «Известия АН СССР, сер. биологическая», 1969, № 3).

В узкой пространстве между двумя предметными стеклами, заполненном питательной агаризовакной средой, помещают проростки бобового растения. Через сутки среду инокулируют клубеньковыми бактериями и наблюдают за скоростью образования клубеньков.

Два предметных стекла толщиной 0,7—0,8 мм с проложенной между ними с одного конца стеклянной пластинкой располагают так, чтобы край одного стекла выступал Над краем другого примерно на 3—5 мм, и прочно перевязывают нитками. Указанное расположение удобно при дальнейшем заполнении агаром пространства между стеклами и при посеве семян. Стеклянные пластинки для прокладки готовят из тонких предметных стекол. Для этого каждое стекло разрезают

166 поперек на три части. Систему из двух предметных стекол и одной пластинки ставят в чашку Петри и стерилизуют в автоклаве. После стерилизации и за

страница 62
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(21.04.2019)