медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

полнения агаризованной средой пространства между стеклами по две таких системы помещают в пробирки (I80X Х40 мм) с жидкой питательной средой следующего состава (в г на 1 л): СаСЬ —0,1; MgSO«-0,12-7H2O; КН2Р04 —0,1; К2НРО4 —0,15; лимоннокислого железа— 0,005; Мо, Си, В, Fe, Мп —следы. Среду разливают в пробирки по 60 мл. Предварительно рН среды доводят до 6,6 серной кислотой' (стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм 30 мин). Кроме того, готовят агаризоваииую среду того же состава, добавляют 0,6% агара для заполнения пространства между стеклами; рН агаризованной среды также доводят до 6,6.

Отобранные простерилизованные семена помещают в чашку Петри с фильтровальной бумагой и оставляют в тонком слое стерильной воды. Посев проводят через сутки. К этому времени семена прорастают (длина проростков 3—5 мм). Расплавленной агаризованной минеральной средой с помощью стерильных пипеток заполняют пространство между предметными стеклами в подготовленной системе. После застывания агара в каждую систему помещают три проростка. Посев проводят асептически. Далее по две таких системы устанавливают в пробирки с жидкой минеральной средой. Через сутки семена и среДу инокулируют тремя каплями густой суспензии двухсуточной культуры клубеньковых бактерий. Для исследований под микросколом через 4—5 суток после посева, соблюдая условия асептики, осторожно стерильным пинцетом вынимают одну систему. Бритвой разрезают нитки. Одно предметное стекло удаляют, На агар наносят каплю воды, на нее помещают покровное стекло и корни просматривают под микроскопом.

Материалы и оборудование. Для постановки опыта: свежие корни бобовых растений с клубеньками, стерильная вода, стерильные чашки Петри. Чашка Петри с 0,1 %-ным раствором сулемы (или 1%-иой бромной водой или с крепкой H2SO«), пипетке, скальпель или вритва. Стерильная среда Фреда (или агариэованный бобовый отвар), стерильные пипетки Мора на 1 мл н стерильные шпатели Дригяльского.

Для анализа; косяки среды Фреде или агарнзованйый бобовый отвар, микроскопы, все необходимое для микроскопироваиия и приготовления препаратов.

187

Глава XV

АНАЛИЗ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОР

К бактериальным землеудобрительным препаратам относятся нитрагин и азотобактерин. Первый содержит клетки клубеньковых бактерий, второй — клетки азотобактера.

Для определения количества жизнеспособных клеток в бактериальных препаратах используют соответствующие питательные среды, При установлении численности клеток азотобактера готовят безазотную минеральную среду Эшби, для быстрорастущих клубеньковых бактерий—бобовый агар (стр. 183), для медленнорастущих (соя, люпин) — маннитно-дрожжевой агар.

При определении качества бактериальных препаратов отмечают: 1) общее состояние препарата (целостность тары и сохранность упаковки, условия хранения, масса препарата, маркировка на таре; 2) количество клубеньковых бактерий в нитрагине и клеток азотобактера в азотобактерине; 3) наличие посторонней микрофлоры в препаратах определяют на МПА.

Для анализа клубеньковых бактерий в нитрагине на стерильное часовое стекло стерильной ложкой берут 10 г нитрагина, переносят его в колбу емкостью 250 мл со 100 мл стерильной водопроводной воды и встряхивают колбу в течение 5 мин. Получают разведение 10-'. Затем готовят последующие разведения (10-*; JO-*; Ю-4; 10-5; 1СН; 10 г „ Ю-8). Для этого из предшествующего разведения после минутного встряхивания стерильной моровской пипеткой переносят 10 мл в колбу с 90 мл воды. Из последних трех разведений берут 2 раза по 1 мл суспензии клеток и переносят в две параллельные чашки Петри. Чашки заливают 10 мл расплавленного к охлажденного до 45°С бобового агара или маишпно-дрожжевого агара.

Чашки с бобовым агаром выдерживают при температуре 28—30°С 3—4 дня, а с маннитно-дрожжевым— 7—9 дней. В последнем случае чашки помещают в эксикатор с влажной фильтровальной бумагой.

После инкубации подсчитывают число колоний клубеньковых бактерий. Если в чашке .Петри выросло более 300 колоний, подсчет их ведут по трем секторам,

!68 каждый из которых равен '/ib площади чашки. Из двух

параллельных чашек выводят среднее количество колоний. Расхождение между числом колоний в параллельных чашках не должно превышать 30%.

Количество клубеньковых бактерий в нитрагине вычисляют по формуле: Х=К"Р, где К — среднее количество колоний иа чашке; Р — степень разведения.

В 1 г нитрагина должно содержаться при выпуске: медленнорастущих клубеньковых бактерий (сои, сераделлы, люпина) не менее 70 млн., а быстрорастущих (гороха, вики, клевера, чины, чечевицы) — не менее 300 млн.; в течение срока годности соответственно не менее 50 млн. и 100 млн.

Одновременно с определением клубеньковых бактерий устанавливают количество посторонних микроорганизмов посевом на мясо-пептокный агар.

Для учета посторонних микробов в культурах быстрорастущих клубеньковых бактерий берут по 1 мл суспензии из разведения ЮЛ в культурах медленнорастущих — из разведения Ю-5, переносят в две параллельные чашки Петри и заливают мясо-пептонпым агаром (ка

страница 63
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(25.04.2019)