медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

устройство (в настоящее время наиболее широко применяется модель КФ-4), которое состоит из фазовых объективов (на оправе имеется буква «Ф»), конденсо ров с набором кольцевых диафрагм и вспомогательного микроскопа (оптического устройства, помещаемого в тубус вместо окуляра при установке фазового контраста).

Метод применяют для исследования живых клеток микроорганизмов, контрастность которых достигается оптическим* путем без вмешательства в физиологические процессы изучаемых объектов.

4 ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ (ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ) МИКРОСКОПИЯ

В СССР метод люминесцентной микроскопии разработан Ж Н. Мейселем. Суть метода в следующем. Некоторые биологические объекты способны при освещении коротковолновыми лучами (сине-фиолетовыми, ультрафиолетовы ми) поглощать их и испускать лучи с более длинной волной (светиться желто-зеленым или оранжевым светом). Это так называемая собственная, или первичная, люминесценция,

18

Нелюминесцируюшле объекты можно обработать специальными флуорохромамн (акридином желтым, акридином оранжевым, аурямином, примулином, тиоф-лавином, конго красным, тетрациклином, хинином) и также наблюдать люминесценцию, но это уже будет. наведенная, или втор и чн а я, люминесценция, которая гораздо чаще используется в микроскопии.

Препараты, окрашенные флуорохромамн, изучают в средах, не люминесцирующих под действиен коротковолновых лучей,— в воде, глицерине, вазелиновом масле или физиологическом растворе.

Оптическая схема люминесцентного Микроскопа отличается от обычной схемы выбором источника света (обычно ртутная лампа, но в случае возбуждения люминесценции объекта сине-фиолетовыми лучами можно использовать и низковольтные лампы) и наличием на пути лучей двух светофильтров: синий светофильтр перед конденсором, пропускающий сине-фиолетовые лучи видимого спектра, и желтый светофильтр в окуляре микроскопа, убирающий синие лучи, мешающие выявлению люминесценции.

Преимущества люминесцентной микроскопии по сравнению с обычной заключаются в следующем: сочетание цветного изображения и контрастности объектов; возможность изучения морфологии живых и убитых клеток микроорганизмов в питательных средах н тканях животных и растений; исследование клеточных микроструктур, избирательно поглощающих различные флуо-рохромы, которые являются при этом как бы специфическими цитохимическими индикаторами; • изучение функционально-морфологических изменений клеток; использование флуорохромов при иммунологических реакциях и подсчете бактерий в образцах с невысоким их содержанием.

ГЛАВА Я

ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О КУЛЬТИВИРОВАНИИ, ТЕХНИКЕ ПОСЕВА И НЕОБХОДИМОМ ОБОРУДОВАНИИ ДЛЯ РАБОТЫ С МИКРООРГАНИЗМАМИ

Выращивание микроорганизмов на питательных средах называется культивированием (лат. cultus — выращивание), развившиеся микроорганизмы — ку л ь2* 19туpoi I. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензии, осадок или пленку, при развитии в ллот-ной среде—колония. Культуры могут быть чистыми (содержат потомство клеток только одного вида) и н а-копнтельиыыи (состоят преимущественно из? клеток одного вида микроорганизма).

Внесение клеток Микроорганизмов или какого-либо исследуемого материала (образца почвы, пробы воды) а стерильную питательную среду для получения чистой Или накопительной культуры называется посевом. Перенесение уже выращенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называется пересевом, или пассированием (лат. passus — чередование).

Обычно микроорганизмы выращивают при определенной постоянной температуре в термостатах (деревянных или металлических шкафах) или термостатных комнатах. В тех и других постоянная температура поддерживается с помощью терморегуляторов.

Культивирование при определенной температуре называется инкубацией или инкубированием (лат. incubatio — выращивание при искусственно созданной температуре).

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде ; пробирках, колбах или чашках Петри.

В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно V» проберет, для анаэробных—%. Если плотная среда в пробирке предназначается для выращивания микроорганизмов в этой же Пробирке, ее при подготовке к стерилизации наливают в пробирки на Vs—'/« их объема. После стерилизации пробирки с еще не застывшей средой раскладывают на ровной- поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки —косые или скошенные среды. Плотная среда, застывшая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком. Столбики (Уз—Уг пробирки) используют для посева культуры уколом (стр. 22). Столбики питательной среды (2/s объема) после стерилизации также применяют для заливки стерильных чашек Петри при микробиологических посевах.

Пробирки со средами в культурами при работе следует устанавливать на штативах; пробирки со средами, подготовленными к стерилизации, помещать в проволочные корзины или металлические ведра с отверстиями; пробирки с культурами при инкубации или

страница 7
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(18.02.2019)