медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

е титра используют газообразующую способность группы бактерий Сой aerogenes на жидкой среде Булира следующего состава: мясо-пептонный бульон —1 л; маннит — 10 г; NaCl — 5 г.

206

Насыщенным раствором соды устанавливают нейтральную реакцию среды, затем подкрашивают насыщенным водным раствором нейтральрота до вишнево-красного цвета, фильтруют, разливают в пробирки с поплавками'и-стерилизуют в автоклаве при 1 атм.

В пробирки со средой Булира вносят по 1 мл суспензии из соответствующего разведения. Посев проводят из всех разведений в двух-трехкратной повторности. Пробирки с посевом выдерживают 48 ч при 42°С.'

Время обесцвечивания ыетнлсиовой

Примерная численность бактерий согласно пробе на редуктазу

Качество молока согласно пробе иа редухтазу

Численность бактерий, - установленная при посеве- испытуемой пробы

Coli-титр

Оценка качества ио-лока на основании всех роназагежй

В связи с тем что В пробах молока могут быть другие бактерии, сбраживающие лактозу с образованием газа, для точного установления наличия кишечной палочки из забродившей жидкости делают посевы на специфическую среду Эпдо. Если бродильная проба положительная и культура на среде Эндо дает ярко-красные колонии, можно считать установленным наличие в_ исследуемом субстрате кишечной палочки. Для полной же идентификации ее нужны еще дополнительные данные (отсутствие разложения желатины, отсутствие газа и кислоты при культуре на сахарозе и образование скатола и индола в мясо-пептонном бульоне).

Материалы и оборудование. При постановке опыт; разные (по качеству) пробы молока, высокие пробирки, цилиндры, иеткленовая синь, редужтазннк с водой, негретой до 38—40° С, пробирки со стерильной водопроводной водой, по 9 ил в каждой, стерильные пипетки Мора на 1 мл, пробирки со стерильной средой Булнра с поплавками, расплавленный мясо-пептонный аир (МПА).

2. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИИ В ЧИСТУЮ КУЛЬТУРУ

Выделение ацидофильной палочки в чистую культуру. Ацидофильная палочка — гомофсрментативнан

молочнокислая бактерия из числа молочнокислых палочек, обитающих в кишечнике человека и животных. Оптимальная температура ее развития 37—40°С, предельная кислотность до 220 Т (2,0%), она отличается устойчивостью к фенолу, образует антибиотические вещества. Кисломолочный продукт, приготовленный с использованием в качестве закваски ацидофильной палочки, имеет большое значение для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, особенно у молодняка.

Для выделения ацидофильной палочки в чистую культуру используют кал теленка. Для ознакомления с микрофлорой кала из него готовят препарат, сушат на воздухе, фиксируют на пламени и красят метиленовым синим в течение 2—3 мин. Подсчитывают количество клеток ацидофильной палочки в одном поле зрения (подсчитывают в 10 полях зрения и берут среднее). В мазке преобладают гнилостные кокковые формы, палочки и встречаются лишь единичные клетки Lactobacteritn acldophilum — тонкие палочки, варьирующие в размере, иногда содержащие зерна вол юти на (хорошо красящиеся метиленовым синим в синий цвет). Затем делают посев кала в стерильное молоко и инкубируют при температуре 37—40°С, оптимальной для развития Lactobacteritn acidophilus..

Из образовавшегося сгустка вновь делают пересев в стерильное молоко и снова выдерживают в термостате при 37—4ОХ (таких посевов можно сделать 3—4). Постепенно ацидофильная палочка, образуя молочную

кислоту и получив оптимальные условия для развития, подавляет развитие гнилостных бактерий, содержащихся в кале. Такую накопительную культуру ацидофильной палочки высевают на плотную питательную среду и

208 из отдельной развившейся колонии выделяют чистую культуру. В качестве плотной питательной среды используют агар с гидролизонянным обратом.

Приготовление г и д р о л и з о в а и н о г о обрата. В бутыль с I л прокипяченного и охлажденного до 45"С обрата добавляют разведенный в небольшом количестве теплой воды 1 г сухого порошка панкреатина и 5 мл хлороформа. Бутыль встряхивают, плотно закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате в течение 3 дней при 40°С. Ежедневно содержимое бутыли встряхивают, после чего открывают пробку для удаления паров хлороформа. Готовый раствор фильтруют и разбавляют в 4—5 раз водопроводной водой. Устанавливают реакцию среды (рН 7,0—7,2) и стерилизуют при 0,6 атм в течение 30 мин.

Lactobacterium acidophilurn образует мелкие колонии в глубине среды, которые следует просматривать под микроскопом (объектив 8Х). Они имеют вид рыхлых тонковолокнистых скоплений неправильной формы, напоминающих кусочки ваты или мха. Иногда их называют паучками. Из характерных колоний, расположенных изолированно от других, готовят фиксированный препарат и петлей делают посев в стерильный обрат.

Ацидофильная палочка образует в стерильном обрате однородный плотный сгусток. Газообразования в культурах не отмечается. Пересевы повторяют, выдерживая пробирки в термостате при 37—40°С. Отбирают те из них, которые сбраживают молоко не позже чем через 12

страница 71
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(19.08.2019)