медицинский каталог




Практикум по микробиологии

Автор Е.3.Теппер, В.К.Шильникова, Г.И.Переверзева

ения реакции, микроорганизмов на химические соединения и физические факторы воздействия, при изучении размеров клеток, характера их расположения и выявления запасных веществ клетки,

23

Препараты микроскопируют, слегка затемняя поле зрения; конденсор несколько опускают, поступление света регулируют вогнутым зеркалом. Вначале пользуются малым увеличением (объектив 8Х), после того как обнаруживают край капли, устанавливают объектив 40Х или иммерсионный (90Х). Более четкие результаты можно получить при микроскопии в темном поле или в фазовом контрасте.

В случае метода раздавленной капли на чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы под ним не образовывались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному и удаляют избыток воды фильтровальной бумагой, поднося ее к краям, покровного стекла. При просмотре приготовленного препарата под микроскопом с иммерсионной спстемой объектива на покровное стекло наносят каплю кедрового масла.

Для длительных наблюдений за. клетками микроорганизмов применяют метод висячей капли. На стерильное покровное стекло наносят иглой негустую суспензию микроорганизмов, выращенных в жидкой питательной среде или подготовленных для данной цели в физиологическом растворе (0,5% NaCl). Покровное стекле перевертывают и помещают на стерильное предметное стекло с лункой посередине так, чтобы капля свободно свисала над лункой. Для герметичности края лунки смазывают вазелином.

Фиксированные препараты микроорганизмов. В микробиологии часто применяют эти препараты. Их рассматривают под микроскопом в окрашенном виде. Под фиксацией подразумевается такая обработка живого объекта, которая дает возможность быстро прервать течение жизненных процессов в объекте, сохранив его тонкую структуру. В результате, фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация необходима и в случае работы с патогенными микроорганизмами ( в целях безопасности).

Приготовление мазка. На чистое обезжиренное* предметное стекло наносят каплю водопроводной воды.

* Для обезжиривания стекол используют смесь этилового спирта и серного эфира в соотношении 1; 1. Обезжиривание проводят вдали от горелок.

г*

Прокаленной бактериологической иглой из пробирки с культурой микроорганизмов берут небольшое, количество микробной массы и вносят в каплю. Каплю тщательно размазывают петлей по стеклу на площади приблизительно 4 см2. Очень густую суспензию разводят водой. Для этого стерильной петлей берут немного суспензии и переносят в каплю воды на другое предметное стекло. Суспензию размазывают тонким слоем, затем мазок сушат, желательно на воздухе при комнатной температуре или при слабом нагревании, держа препарат высоко над пламенем горелки. Сильный нагрев препарата при подсушке мазка не рекомендуется, так как белки клеток свертываются, искажая структуру и форму клеток. Высушенный препарат фиксируют.

Фиксацию мазка проводят или над пламенем, горелки (при исследовании формы клеток), или с помощью химических соединении (для исследования внутренней структуры клеток). В первом случае препарат 3—4' раза медленно проводят тыльной стороной над пламенем горелки. При фиксации с помощью химических веществ используют хромовые соединения, формалин, осмиевую кислоту, ацетон.

Один из наиболее распространенных приемов фиксации— обработка препарата 96%-ным спиртом или смесью равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова). При этом препараты погружают на некоторое время в фиксирующую жидкость.

Окрашивание препарата. При окрашивании' мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. В зависимости от красителя и целей исследования продолжительность окрашивания различна (1—5 мин, в отдельных случаях 30 мин и дольше). После окончания окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, подсушивают на воздухе и микроскопируют.

Существуют простые и дифференцированные методы окраски. При простой окраске используют один какой-либо краситель, например метиленовый синий, фуксин, генциан фиолетовый в щелочных или карболовых растворах. Прокрашивается вся клетка. При дифференцированной окраске разными красителями окрашиваются отдельные структуры клетки. Таковы методы окраски по Граму, окраска спор.

Красители, у,которых при диссоциации выделяются водородные ионы, придающие красителю кислый характер, называются кислыми. Они окрашивают (в виде аниона) вещества основной природы. Красители, у которых при диссоциации выделяются гидронсилъиые ионы, называются основными. Основные красители окрашивают (в виде катиона) вещества кислотной природы. Так как в клетках микроорганизмов имеются и кислотные, и основные радикалы — СООН и NH3, то оии могут окрашиваться н основными, и кислыми красителями,

В микробиологической практике кислые н основные красители используются в виде солей, так как они способны вступать в реакцию с ки

страница 9
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74

Скачать книгу "Практикум по микробиологии" (2.95Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [обратная связь]


Химический каталог Rambler's Top100

Copyright © 2009
(23.04.2019)